口蹄疫病毒结构蛋白vp0 抑制i 型干扰素信号通路的激活.pdf

微生物学报 Acta Microbiologica Sinica 2017, 57(7): 994-1003 /actamicrocn DOI: 10.13343/ki.wsxb Research Article 研究报告 口蹄疫病毒结构蛋白VP0 抑制 I 型干扰素信号通路的激活 1,2 2 2 1* 2* 牟宏芳 ，马旭升 ，罗志宽 ，张坚 ，郑海学 1 兰州大学基础医学院，甘肃省新药临床前研究重点实验室，甘肃 兰州 730000 2 中国农业科学院兰州兽医研究所，家畜疫病病原生物学国家重点实验室，国家口蹄疫参考实验室，甘肃 兰州 730046 摘要： 【目的】研究口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白 VP0 对 I 型干扰素信号通路的影响。【方法】通过反 转录 PCR 构建 VP0 真核表达载体，利用 Western blotting 验证 VP0 蛋白转染 HEK-293T 细胞后的表达 情况；Real-time PCR 检测 VP0 蛋白对 FMDV 在 BHK 细胞上复制的影响，检测 VP0 蛋白对 SeV 诱导 的干扰素信号通路分子 RIG-I 、IRF3 、IFN-β及下游刺激基因 ISG15 、ISG20 表达的影响；双荧光素酶 报告基因检测系统检测 VP0 蛋白对 SeV 诱导的 IFN-β 和 NF-κB 启动子激活以及对 RIG-I 样受体 (RIG-I-like receptors ，RLRs)信号通路分子激活 IFN 启动子的影响；免疫共沉淀检测 VP0 蛋白与 RLRs 信号通路中关键分子的相互作用。【结果】成功构建了 pCAGGs-VP0 真核表达载体，可以在 HEK-293T 细胞中表达；FMDV 感染后的 4–6 h ，VP0 蛋白显著促进 FMDV 在 BHK 细胞上的复制(P0.01 或 P0.05) ； VP0 蛋白明显抑制干扰素下游刺激基因的表达(P0.01 或 P0.05) 。在双荧光素酶报告基因检测实验中，VP0 蛋白抑制 SeV 诱导 IFN-β 和 NF-κB 的活化具有剂量依赖性(P0.01) ，并对 RIG-I、MDA5 、VISA 、TBK1 和 IRF3 介导的 IFN-β产生具有抑制作用，但是对 IRF7 没有明显的影响。免疫共沉淀显示 VP0 蛋白可与 IRF3 发生相互作用。【结论】证实 VP0 蛋白可以通过与 IRF3 相互作用来抑制 I 型干扰素信号通路的激活。 关键词：口蹄疫病毒，VP0 蛋白，I 型干扰素，IRF3 口蹄疫(Foot-and-mouth disease ，FMD)是由口 型和 SAT3 型，各个血清型又有多个亚型，各血清 蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus ，FMDV)引 型之间无交叉保护现象。口蹄疫病毒的 RNA 由 起偶蹄动物的一种急性、烈性、高度接触性传染 8500 个核苷酸组成，编码一个大的多聚蛋白复合 病，能造成严重的经济损失和社会影响。病毒衣 体，该复合体由自身编码的蛋白酶(L、3C)及少数 壳呈正二十面体结构[1] ，该病毒已发现 7 个血清 宿主因子裂解后形成多个前体蛋白，并最终裂解 型：A 型、O 型、C 型、Asial 型、SAT1 型、SAT2 为成熟的 8 个非结构蛋白(L、2A 、2B 、2C 、3A、 基金项目：国家自然科学基金 ；农业部 948 (2015-Z6) *通信作者。张坚，Tel ：+86-931-8623573 ，E-mail ：zhangjian@ ；郑海学，Tel ：+86-931-8342086 ，E-mail ：haixuezheng@163.com 收稿日期：2016-09-20 ；修回日期：2016-12-06 ；网络出版日期：2016-12-27 牟宏芳等 | 微生物学报, 2017, 57(7) 995 3B、3C、3D)和 3 个结构蛋白