液相色谱-串联离子阱质谱同时测定牛奶中的12种β-内酰胺类药物残留 .doc

液相色谱-串联质谱法快速同时测定婴幼儿配方乳粉中氯霉素、三聚氰胺、甲硝唑洛硝达唑(郭启雷 刘艳琴 史海良 田艳玲 （国家食品质量安全监督检验中心，北京 100094） 摘要 建立了婴幼儿配方乳粉中三聚氰胺、氯霉素、甲硝唑洛硝达唑-串联四极杆质谱联用测定方法。样品经碱性乙腈提取，以MGⅢ-C18 (2.1×150 mm, 5μm)分离，流动相为0 mmol/L乙酸铵水溶液（含0.）和（梯度洗脱），流速mL/min。采用多反应监测正离子或负离子模式, 可以一次性对婴幼儿配方乳粉中的三聚氰胺、氯霉素、甲硝唑洛硝达唑g/kg，方法回收率为61.4%～96.2%，相对标准偏差（RSD）为1.83%～9.75%。经测定多种市售婴幼儿配方奶粉，表明该方法操作简单、测定结果准确，可用于婴幼儿配方奶粉中三聚氰胺、氯霉素、甲硝唑洛硝达唑甲硝唑洛硝达唑三氰胺一种化工材料，有肾毒性，作为添加剂并没有实际作用。但因其一个碳原子上含有3个N，而普通蛋白质仅含有一个N，目前我们所常用的测蛋白质含量方法就是定N法，因此添加此种物质可以“提高”蛋白质含量，降低生产成本，中爆出此种物质，就是用于此种目的甲硝唑洛硝达唑具广谱抗厌氧菌和抗原虫的作用，主要用于预防和治疗厌氧菌引起的感染。目前,测定甲硝唑洛硝达唑的方法有等[1]。液相色谱-质谱联用技术是近年来新兴的检测技术, 由于其准确、高效和高灵敏度, 符合目前食品安全检测所追求的快速高效的要求, 目前还未见液相色谱- 串联质谱联用法用于同时检测氯霉素、三聚氰胺、甲硝唑洛硝达唑, 采用高效液相色谱串联质谱仪进行检测, 前处理简单，灵敏度高，适合于婴幼儿配方乳粉中氯霉素、三聚氰胺、甲硝唑洛硝达唑 2 实验部分 2.1仪器与试剂 Agilent 6410 型串联三重四极杆质谱（美国Agilent公司），配Agilent1200型液相色谱仪； KQ-5200型超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；TGL-16M型高速台式冷冻离心机（湘仪离心机仪器有限公司乙腈色谱纯；甲酸乙酸铵三乙胺分析纯；甲硝唑洛硝达唑纯度w≥9%， Sigma公司。%氨水的乙腈000 r/min高速离心10min，取上清液过滤膜）。 2.3 标准溶液的配制 标准储备液：称取甲硝唑洛硝达唑甲醇配成0.1 mg/mL的标准储备液，该溶液在-18℃保存。 标准工作溶液：取标准储备液mL容量瓶中，用水定容标准溶液氯霉素洛硝达唑、甲硝唑g/mL；三聚氰胺: 10000 ng/mL。 ：标准工作溶液色谱柱：资生堂MGⅢ-C18柱：mm×150 mm，m ；流速：mL/min；柱温：℃；进样量：0 μL；流动相A相乙酸铵溶液（）相； min，95% A ；5→20 min，95% A线性降至65%A；20→25 min，65% A线性降至5%A；25→35 min，5%A。三聚氰胺、洛硝达唑、甲硝唑为正离子模式，氯霉素为负离子模式；检测方式：多反应检测；干燥气：N2 ；雾化气压力：275.8 kpa；干燥气温度：340 ℃；干燥气流速：8 L/min；定性离子对、定量离子对及碰撞能量见表甲硝唑洛硝达唑of Mass spectra of Melamine, chloramphenicol, Metronidazole, ronidazole 被测物质名称 Name of compound 母离子 Parent ion （m/z） 子离子 Product ion （m/z） 碎裂电压 Fragment（V） 碰撞能量 Collision Engerg（V） 三聚氰胺Melamine 127.0 85.1*；68.0 100 15；20 氯霉素chloramphenicol 321.0 152.0*；257.0 80 15；5 甲硝唑Metronidazole*；128.2 100 25；10 洛硝达唑ronidazole*；55.1 60 5；20 * 定量离子（Quantitative ion） 3 结果与讨论 3.1 样品前处理方法的优化 乳粉需要用水溶解后再进行提取，如果加水比例小于1:7.5，三聚氰胺加标回收率﹤50%为了充分提取样品中甲硝唑洛硝达唑残留，本实验首先分别选择乙腈、甲醇、做为样品提取溶液，试验结果均不理想，随后经过反复试验，发现%氨水的乙腈能有效地提取样品中，因此，选择此溶液作为样品提取液。 三聚氰胺洛硝达唑、甲硝唑、氯霉素.3 色谱条件的优化 3.3.1 色谱柱的选择为了有利于色谱峰的分离及锋形的改善，本方法分别采用资生堂 MGⅢ-C18色谱柱(150 mm × 2.1 mm, 5 μm)、ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱和ZORBAX SB-Aq色谱柱(150 mm × 2.1 mm, 3.5