确认PUMP梯度混合的正确性 - 建宏层析.PDF

建宏層析企業股份有限公司 VERCOTECH INC 地址：台北市內湖區港墘路221 巷 19 號5 樓 電話：(02)2657-8289 傳真：(02)2657-8389 HPLC 確認雙PUMP 高壓式Gradient 梯度混合的正確性 Isocratic HPLC 供輸一定組成的移動相的操作 , 不論是經由單一 PUMP 的供輸 , 或多溶媒 A,B,C,D, 送進單一控制閥經由 PUMP 的供輸 , 只要確認該 PUMP 供液正確性 , 都會有可靠優良再現性的HPLC 分析結果 . Binary Gradient HPLC ( 2-Solvent Gradient HPLC ) 兩液梯度混合供應操作 即兩液的混合比例將隨時間設定而改變者 , 因此除了確認 PUMP 供液的正確 性 , 需確認兩液改變比例梯度混合的正確性 . 欲確認雙 PUMP 混合的正確性 , 需先確認兩個 PUMP 各別的流速是否正 確 , 使用量測法 , 測量PUMP 的流速 , 當巳確認兩個PUMP 的流速是正確的 , 準備巳抽氣過濾的一瓶水和一瓶0.3%Acetone in H2O , Acetone 的濃度會因 UV Detector 感度不同而做調整 , Acetone 在UV 254nm 俱吸光性, 原則上 , 當在執 行梯度混合測試 , 輸送含有Acetone in H2O 的PUMP 到達 100%時 , 其吸收值 不超過1 Volt 為原則 , 兩個 PUMP , A PUMP 走水 , B PUMP 走 0.3%Acetone in H2O , 分別先各別抽順 , 抽順之後再將流速調為 1ml/min , A B PUMP 的比例為 各50% , 系統需接上抗壓管 , 壓力約為1000psi 以上即可 , 50%的比例需平衡30 分鐘 , 之後再將A B PUMP 的比例調為A=100% , B= 0% , 梯度的變化如下 時間梯度 時間 (分) A % B% 0 INIT 100 0 1 1 100 0 2 1.01 90 10 3 11 90 10 4 11.01 50 50 5 21 50 50 6 21.01 10 90 7 31 10 90 8 31.01 0 100 9 41 0 100 10 0 1 建宏層析企業股份有限公司 VERCOTECH INC 地址：台北市內湖區港墘路221 巷 19 號5 樓 電話：(02)2657-8289 傳真：(02)2657-8389 將此比例變化輸入到PUMP 的控制軟體上 , 若無軟體控制的PUMP , 可輸入至 PUMP 本身的Gradient 程式內 , 當A% / B% = 100 /0 平衡至Detector 穩定