蛇床子素的抗炎作用及其机制.pdfVIP

时珍国医国药2012年第23卷第4期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2012VOL．23NO．4 蛇床子素的抗炎作用及其机制 于鹏霞 ，喻婉莹 ，阚伟娟 ，李敏敏 ，宋吉帅 ，赵 烽 (1．烟台大学药学院，山东 烟台 264005；2．烟台赛尔斯生物技术有限公司，山东 烟台 264006) 摘要 ：目的 研究蛇床予素的抗炎作用及其分子机制。方法 用LPS刺激小鼠单核 巨噬细胞RAW264．7释放TNF— 、IL 一 6、NO等炎症介质，评价药物对巨噬细胞释放炎症介质的抑制作用。以ELISA法检测TNF一0I、IL一6的含量．以Griess 法检测NO的含量，同时以MTI法评价细胞毒性。Westernblot法检测 iNOS、COX一2及内参蛋 白B—actin水平。比色法 检测 COX一2酶活性。结果 蛇床子素在 12．5～100 mo1·L。。浓度范围内可明显抑制 LPS诱导小鼠巨噬细胞 RAw 264．7释放炎症介质TNF一 、IL一6、NO，并呈现 良好的剂量依赖关系。Westernblot结果表明蛇床子素能够明显下调 iN— OS和COX一2蛋白表达水平。比色法测定酶活性结果提示蛇床子素对COX一2酶活性无明显抑制作用。结论 蛇床子 素通过下调 iNOS和COX一2蛋白表达水平，能明显抑制巨噬细胞释放炎症因子TNF一0、【IL一6和炎症介质 NO．这可以 为蛇床子素以及相关制剂的临床应用提供一定的理论依据。 夭键 硎 ：蛇床子素 ； TNF—d； IL一6； iNOS； COX一2 D0I标识 ：doi：10．3969／i．iSSFI．1008—0805．2012．04．034 中图分类号：R962 文献标识码 ：A 文章编号：1008．0805(2012)04-0866-02 蛇床子为伞形科蛇床属植物蛇床 Cnidiummonnieri(L．) (菲律宾奥林巴士公司)；恒温CO，培养箱 (美国Thermo公司)； Cuss的成熟干燥果实，《神农本草经》记载 “具有温肾助阳、祛风、5810R型台式高速低温离心机 (德国Eppendorf公司)；全 自动酶 燥湿、杀虫之功效，用于阳痿、宫冷、不孕、寒湿带下、湿痹腰痛I夕 标仪 (美国Biotek集团)。 治外阴湿疹，阴道炎”。临床 以外用制剂为主，主要用于治疗滴 2 方法 虫性阴道炎 、银屑病 等。 2．1 细胞培养及传代 小鼠单核巨噬细胞株 RAW264．7购 自 蛇床子素 (Osthole)是从蛇床子中提取的主要香豆素类化合 中科院上海细胞库(ATCCTIB一71)；用含 10％胎牛血清 、100 g 物。其化学结构如图1所示。文献报道蛇床子素具有抗炎 J、 ·ml链霉素，100U ·ml 青霉素的RPMI1640培养液于37~C 抑制血栓形成 。、抗凝血 、抗心律失常 -，J、抗过敏 等药理作 CO：培养箱中常规培养 ，隔天传代，细胞于对数生长期呈半贴壁 用。但是作为蛇床子的主要有效成分，蛇床子素的抗炎作用机制 状态生长。 尚未充分阐明。本研究利用 LPS诱导体外炎症模型，检测了蛇 2．2 NO浓度测定 由于NO极不稳定，在体内很快生成亚硝酸 床子素对LPS诱导巨噬细胞RAW264．74释放炎症介质 TNF— 基 (NO一)和硝酸基 (NO )，故采用 Griess法测定样 品中的 、 IL一6及NO的抑制作用，以及对 iNOS、COX一2蛋白表达水平 NO：～作为衡量NO水平的指标。Griess试剂 A：1g·L～N一萘 的影响 ，旨在探讨蛇床子素的抗炎分子机制。 乙二胺盐酸盐；Griess试剂 B：体积分数 p‘(HPO )=5％，10g· L。。对氨基苯磺酰胺。使用前等体积混合试剂A和B。 取对数生长期的RAW264．7细胞，用 0．25％胰酶消化液消 O 化，制成每毫升含 1X10。个细胞的单细胞悬液，接种于96孔细