植物激活蛋白的纯化及其抗病作用机理初探.pdfVIP

植物激活蛋白的纯化及其抗病作用机理初探 摘 要 从真菌 ((Alternariaap.)中提取的植物激活蛋白是一种高效、多功能、广谱性、无 污染的能诱导植物对病虫害产生免疫抗性的新型植物诱导物质。本实验对植物激活 蛋白处理的接种番茄灰霉病菌的番茄幼苗中三种主要防御酶POD,PPO,CAT活性、 POD同工酶的动态变化及植物激活蛋白对番茄叶片中姆irl抗病性通调基因及参与 蜡质合成基因Cerl进行了研究。结果如下: 1植物激活蛋白的纯化及抗病性测定 (1)将粗蛋白通过分级沉淀，过离子柱和疏水柱进一步纯化得到纯蛋白。 (2)植物激活蛋白抑菌实验结果表明:植物激活蛋白没有直接杀菌的作用。 (3)植物激活蛋白诱导番茄抗番茄灰霉病的防治效果达7130% 2植物激活蛋白对番茄幼苗主要防御酶酶活性的影响 (1)lAg-mL,2Ag-mL,411gm『的植物激活蛋白对抗、感番茄幼苗中POD,PPO, CAT均具有诱导作用。且2wg-mL，的植物激活蛋白诱导效果较好。 (2)植物激活蛋白对番茄与番茄灰霉病菌互作中POD,PPO具有相似的诱导效 果。经植物激活蛋白处理后，番茄主要防御酶POD,PPO活性均比空白对照高， CAT活性显著下降。表明植物激活蛋白可诱导和增强POD,PPO的表达和过氧化 氢含量的提高，从而增强植物的防御反应。 (3)POD同工酶谱带变化:当用2Wg-mL-，的植物激活蛋白和0.01%SA处理后， 中蔬6号与空白对照相比，bi,b2带加强，0.01%SA处理出现了aa2两条新的条 带。在与灰霉病互作中，a2,a3,b2条带明显增强，同时也出现了a,新的条带。说 明植物激活蛋白可诱导或增强b,,b2,a,,a2,a3带POD同工酶谱带的表达。 3植物激活蛋白对番茄叶片Nprl,Cerl基因相对转录水平的影响 用RT-PCR和PCR方法对番茄中中Nprl抗病性通调基因及参与蜡质合成基因 Cerl基因的。DNA,DNA进行了扩增，对退火温度，模板浓度等条件进行了优化。植 物激活蛋白能够诱导其大量表达，处理第二天Nprl的表达量约为对照组的6倍， Cerl基因的表达量约为对照组的2倍。 以上结果说明，植物激活蛋白能诱导植物防御酶系中重要成员POD,PPO,CAT 的表达，以及姆r;1,Cerl基因的相对表达水平差异表达。从分子水平和代谢水平说 明了植物激活蛋白具有激活植物防御反应和系统获得抗性抗病性信号传导通路调 控基因的一些作用机制，进一步的结果还有待研究。本研究通过对植物激活蛋白抗 病作用机制的阐明为适时、适量的田间应用提供理论指导。 关键词: 植物激活蛋白 番茄 防御酶 诱导抗性 仰r] Cerl 半定量RT-PCR 灰霉病菌 PurificationandMachanismofresistantdisease ofPlantactivatorprotein Abstract Plantactivatorproteinwasanewtypeofbroad-spectrumbiologicalpesticide withhighlyactivityandmulti-functionswhichisseparatedrfomaAlternariasp.It couldbewidelyusedincropwiththehighefficiency.Thisformulationisstablefor morethantwoyearsbyvacuumpacking.Howeverwedonotcompletelyunderstand themodeofactionofplantactivatorproteinatpresent.Thesystematicdynamic characteristicsofpexoxidase(POD)anditsisozyme,polyphenoloxidase(PPO)andits isozyme,catalase(CAT)werestudiedintomatoleaveswhichwereinoculatedwith theBotrytisCinereaandtreatedwithdifferentconcentrationsofplantactivator protein.Theexpr