实验大肠杆菌的培养与分离.ppt

细菌的外形与大小 单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。 菌落是鉴定菌种的重要依据。 三、消毒和灭菌 （五）大肠杆菌分离后保存 1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。 2、长期保存：甘油冷冻管藏法 1.在培养后如何判断是否有杂菌污染? （1）菌落的形态看，是否湿润，透明，粘稠，颜色等。 是区别细菌、酵母、放线菌和霉菌关键指标。 （2）显微镜观察其形态、大小、看是否有菌丝、孢子、 芽孢。是区别细菌、酵母、放线菌和霉菌关键指标。 （3）上述方法较难区别同类的不同物种，需借助化学和 进一步的形态观察，如用革兰氏染色法等。 2.实验完成后,接种过细菌的器皿应如何处理? 所有接触过菌的器皿都要先高压灭菌后再洗涤（特别是培养基）； 使用后的废弃物也要高压灭菌后再抛弃 3.如果分离的是转基因的大肠杆菌,如何保证不被普通的大肠杆菌所污染? 转基因用的质粒不是细菌中原有的，而是经过改造的，通常加入了抗性基因的DNA序列，所以可用含有相应抗生素的培养基对菌体进行培养。 （一）培养基的制作是否合格 将未接种（空白）的培养基放在恒温箱中保温1～2 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。 （二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。 * * 第一部分 :微生物的应用 细菌的革兰氏染色 (P23) 革兰氏染色法是一种用于细菌的染色法。此法将细菌分为两类，即革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。所谓革兰氏阳性菌就是用革兰氏染液染色后，再用脱色液处理，细菌仍保留染色液的颜色；革兰氏阴性菌则相反。这两种菌的差别在于细胞壁的成分不同。 大肠杆菌属于革兰氏阴性菌 异养兼性厌氧菌 大肠杆菌属于杆状菌 图1-1 常见的三种细菌典型形态 A.球菌 B.杆菌 C.弧菌 二、培养基 培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。 （1）按物理状态来分： 培养基可分为固体培养基和液体培养基。 （2）按功能来分，可分为选择培养基和鉴别培养基。 （3）按成分来分，可分为天然培养基和合成培养基。 1.培养基的类型和用途 液体培养基：扩大培养 固体培养基：分离、纯化 2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方 3.不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和氮源、 无机盐、生长因子等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH 、氧气、渗透压的要求． 细菌喜荤，霉菌喜素 细菌中性偏碱，霉菌中性偏酸 ☆ 菌落 液体培养基： 表面生长 均匀混浊生长 沉淀生长 ☆ 无菌技术 1.无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。 成功地培养微生物的关键。 （１）消毒定义： 三.消毒与灭菌的概念及两者的区别 （2）灭菌的定义： 3.常用的消毒与灭菌的方法 是指利用化学或物理方法， 杀灭大部分病原微生物的方法。 是指利用化学或物理方法，杀灭或清除环境中 一切微生物（包括芽胞、孢子） 的方法 高压蒸汽灭菌 灼烧灭菌 干热灭菌 灭菌方法： 煮沸消毒法 巴氏消毒法(70-75℃，保温30分钟) 化学药剂消毒法（酒精、氯气等） 紫外线消毒法 消毒方法： 培养基、无菌水、 各种耐高温的玻璃金属器具 需要保持干燥 耐高温的玻璃金属器皿 接种环等金属器具 高压蒸汽灭菌锅 1kg/cm2 、121℃ 下维持15min. 彻底杀死 部分杀死 1、灼烧灭菌 1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？ 2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶 （3） 实验操作者的双手 答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。 实验用具 LB固体培养基 大肠杆菌菌液（LB液体培养基） 培养皿 接种环 酒精棉 酒精灯 镊子、火柴、记号笔 二、大肠杆菌的培养和分离实验操作 （一）培养基的配制与灭菌 取2个250ml的三角瓶中分别装入50mlLB液体培养基和50mlLB固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上封口膜，牛皮纸包装后高