实验荧光光谱吕己莉.pptx

实验4-10 荧光光谱;一、实验背景; ;二、实验原理;荧光光谱的基本原理;（二）三个基本定律 为让一种物质发射荧光，它必须吸收光和其它形式的能量。 一般来说，荧光波长比激发光的波长长，即存在斯托克斯线（但也存在荧光波长比激发光波长短的现象，即反斯托克斯线）。 荧光的量子产额Q决定于荧光发射光子数与吸收的激发光子数的比值。由于激发分子的去活化过程包括辐射跃迁和无辐射跃迁，因而荧光量子产额可以表示为： ;（三）荧光分析的两个优点 高选择性——每种荧光物质都有自己的特征荧光光 高灵敏度——荧光分析法比吸收光谱分析法高二到三个数量级 （四）影响荧光的几个主要因素 样品温度——许多样品温度每升高1度，荧光强度就会降低1%-2%，具体下降的百分比与样品类型有关 样品的光化反应——在较大光子能量激发光的照射下，有些样品会因为产生光化反应而受到破坏，使荧光强度信号随光照时间增加而逐渐下降。 ;杂散光干扰——在实验中可观察到激发光溶剂分子、小颗粒或气泡的散射光和拉曼散射光引起的吸收峰，这些吸收峰在一定情况下会对荧光光谱的测量造成干扰。 溶剂——同一种荧光物质在不同的溶剂中，其荧光光谱的位置和强度都会有显著的差别。 溶剂的拉曼散射光——在激发光波长边出现类似荧光的拉曼散射峰、基本不随样品浓度改变 ;样品浓度效应——样品浓度过高时由于激发光的吸收损失各荧光的重吸收导致荧光光谱分布改变，“向长波位移”。同时被激发的分子易相互作用，产生浓度猝灭。 7. 样品的污染 8. 溶解氧——对一定的样品具有明显的荧光消光效应 9. PH值——荧光物质具有弱酸弱碱性时，溶液pH值的改变会影响荧光物质的结构从而改变其荧光光谱和荧光强度 ;三、实验装置;四、实验内容; 3、样品的发射光谱特性：将激发光波长设置在激发光谱的峰值波长处，对被测样品照射，然后扫描荧光发射波长，得到荧光强度相对强度与荧光波长的关系图（被测样品的荧光光谱），保存数据。 4、溶剂的荧光光谱特性：测量蒸馏水的荧光光谱，找出蒸馏水的荧光峰。 5、荧光强度I与样品浓度C的关系：以配制好的不同浓度维生素溶液为各种样品，自选参数测试，做出I-C曲线。 ; 6、荧光猝灭：取五只试管，各放入5mL的5μg/mL维生素溶液，再向每只试管中分别滴入0、1、2、3、4滴浓度为0.1mol/L的NaOH溶液，并分别测出它们的相对荧光强度I。以未滴NaOH溶液的荧光强度为I1，作出I1/I-CQ曲线。 7、狭缝宽度的影响：将一定浓度的蒽的乙醇溶液（适量）放于样品池中并盖好以防止挥发。取5nm缝宽，λex选定在365nm。扫描发射单色仪记录荧光发射光谱曲线I- λem，再将缝宽选为10nm、20nm等，重复上述步骤并记录荧光发射光谱。比较不同缝宽的曲线并分析之。 ;五、注意事项;六、参考文献