香烟提取物对人肺泡Ⅱ型上皮细胞MMP-9、TIMP-1分泌影响及意义.pdf

1啪帅灿姗啪帅啪m帅㈣ 目 录 中文摘要……………………………………………………………………·1 英文摘要……………………………………………………………………4 响及意义 前言…………………………………………………………………………………………8月JJ舌…………………………………………………………………………………………‘8 材料与方法……………………………………………………………9 结果………………………………………………………………………………………··16 附图…………………………………………………………………………18 附表………………………………………………………………………………………·24 讨论………………………………………………………………………………………··25 结论………………………………………………………………………………………··28 参考文献……………………………………………………………·28 l 综述基质金属蛋白酶及细胞因子之间的关系与肺间质纤维化………3 致谢………………………………………………………………………………………………·41 个人简历…………………………………………………………………“42 中文摘要 I MP一1分泌 香烟提取物对人肺泡Ⅱ型上皮细胞MMP一9、T 的影响及意义 摘 要 目的：研究表明，香烟烟雾中的有害毒性物质多达上千种，是多种肺 部疾病的共同危险因素。也有研究提出，吸烟可能与特发性肺纤维化(IPF) 的发病有着密切的关联，但其具体作用机制尚不完全清楚。香烟烟雾中含 致蛋白酶／抗蛋白酶失衡参与众多肺部疾病的发病。近年，在肺间质纤维 例失衡逐渐成为研究的热点和重点。其中，MMP．9(基质金属蛋白酶．9) 作为一种重要的基质金属蛋白酶，在细胞外基质降解、肺组织结构重塑等 多种生理病理过程中发挥重要作用，参与多种肺部疾病的发生，其活性受 特异性抑制剂，即基质金属蛋白酶抑制剂．I(TIMP．1)的调节。在各种外界 刺激因素的作用下，二者比例及相互作用发生紊乱，可导致细胞外基质降 解受阻、细胞外蛋白沉积、肺组织重构等病理改变，从而参与肺间质纤维 interstitial 化(pulmonaryfiberosis)的发病。 本实验旨在通过研究香烟提取物(cigerettesmoking 外培养的肺泡II型上皮细胞来源的人A549细胞分泌基质金属蛋白酶 inhibitorof metal 间质纤维化过程的可能机制。 方法：体外培养人A549细胞，取指数生长期细胞用于实验。两支去 过滤嘴香烟由经改造的50ml注射器负压吸引装置连续匀速抽吸燃烧着，将 烟雾经另一出口入20ml 1640培养基中制成悬液。15分钟内将2支香烟燃 m孔径的滤器过滤，除去细菌和杂质，所得溶液在30分钟内用于实验。将 原液配成不同浓度干预人A549细胞24小时，并依据浓度的不同将实验分 中文摘要 的培养上清液。光学倒置电子显微镜分别观察四组细胞干预24dx时后的形 的浓度；分别收集干预24h后各组培养细胞，提取细胞中的蛋白质，BCA 法测定蛋白浓度，Western 结果： 1、细胞形态学变化 倒置显微镜观察各组培养24小时后的细胞形态。对照组细胞表现为 贴壁、扁平梭形生长，细胞形态规则，细胞生长旺盛。在经过不同CSE 干预组)三组细胞形态较对照组差异较大，且呈现出干预浓度越高，细胞