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一例延边黄牛放线菌病诊疗 摘要:文章对在延边大学农学院动物医院就诊的一起延边黄牛放线菌病的诊疗过程进行了详述。结果表明:PCR诊断方法特异敏感,手术方法切实可行,中西药结合疗法行之有效,患牛愈后良好,无不良反应。该诊疗过程具有一定的借鉴与推广价值。 关键词:牛放线菌;PCR诊断;中西药结合 中图分类号:S811 文献标识码:A 文章编号:1674-0432(2010)-07-0189-1 0 前言 牛放线菌病是由牛放线菌引起牛的一种慢性传染病,主要特征是在头、颈、下颌和舌上发生放线菌肿,临床以2-5岁牛易感,常因外伤而感染,呈散发过程。现将一例延边黄牛放线菌病病例的诊疗过程概述如下。 1 病情介绍 2010年4月,延边大学农学院动物医院接诊一例疑似牛放线菌病的病例。病牛属延边黄牛种系,颈部右侧有一直径为10cm的肿块,肿块坚硬,无弹性,无热痛,界限明显。患牛体温、精神和食欲均正常。 2 诊断与结果 2.1 染色检测 以一次性5ml注射器于患部吸取菌液,取一部分涂在载玻片上,加入一滴15%氢氧化钾溶液,盖以盖玻片、压片,镜检发现病原菌呈菊花瓣状菌丝,末端膨大,整体呈放射状排列。革兰氏染色呈阳性反应。而牛放线菌属革兰氏阳性菌,且形态也相符,初步支持病原体可能为牛放线菌。 2.2 PCR检测 应用Chelex-100法提取病原菌完整基因组DNA,以周双清等设计的引物(27F:5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′;1492r:5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′)作PCR检测,经1%琼脂糖凝胶电泳,在1500bp处可见一特异条带,而阴性和空白对照组均未出现。结果表明,本病例为细菌性疾病,病原菌为牛放线菌。 3 手术 3.1 麻醉与消毒 2%静松灵5ml肌肉注射,待患牛自然卧倒,取右侧向上的横卧姿势,将四肢绑定于患牛体下的铁架上,用木梆横放于患牛的口腔,防止牛窒息和咬舌。用0.2%的普鲁卡因局部麻醉;对患部进行剪毛,用0.1%新洁尔灭清洗患部,盖以手术盖布,再用5%碘酊和75%酒精消毒患部。 3.2 手术 沿患部大血管和神经的走向下刀,切开“T”形切口,钝性剥离周边组织,尽量避免对包囊壁的破坏,将肿块完整取出,以防形成管瘘;用生理盐水冲洗创腔内渗出物后,以酒精棉擦拭创腔内部,并按照先后顺序倒入5%碘酊和75%酒精对创腔消毒;经结节缝合“T”形创口,用5%碘酊和75%酒精消毒缝合后的创面。 4 治疗 4.1 抗生素疗法 采用240万U青霉素注于术后缝合部分周围,1次/天,连续注射一周,每天以5%碘酊和75%酒精对创面消毒一次。同时,静脉注射10%碘化钠,50-100ml/次,隔日1次,共用1周。 4.2 中药疗法 在术后应用西药的同时灌服中药,配方为:芒硝90g,黄连45g,黄芩45g,郁金45g,大黄45g,栀子 45g,连翘45g,生地45g,玄参45g和甘草24g。水煎服或涂抹于患部均可,或两种方法联合应用效果更佳。 5 结论 细菌病的诊断方法较多,一般涂片镜检只能观察细菌的轮廓、形态和染色特性等,基于此可做出初步诊断。但想确诊需要进行PCR、RT-PCR、realtime-PCR等分子生物学方法,其中得到相对高纯度基因组DNA是扩增特异目DNA片段的关键。本诊断采用周双清等发表的Chelex-100法提取牛放线菌基因组DNA,即以由苯乙烯和苯二乙烯组成的独特螯合树脂提纯基因组DNA,其可高亲合结合多价阳离子,去除样品和缓冲液中的金属离子,同时避免在煮沸过程中模板DNA的降解,该方法简便、省时和经济,适用于大规模快诊断。以此方法提取的牛放线菌基因组DNA为模板,经特异性引物,通过PCR方法扩增牛放线菌的16S rRNA的前DNA,可直观观察到特异目的条带,为确诊提供了可靠的依据,也使手术与治疗更具针对性。 在手术中未采用常用的“1”形切口,而以“T”形切口代替,便于手术操作和内部包囊的取出;采取钝性剥离,有助于完整取出包囊,保护了周边血管和神经免受损伤,也避免了包囊内含有放线菌浓液的溢出,而污染手术的创口。牛放线菌对青霉素非常敏感,能较好的抑制手术后牛放线菌的进一步滋生。在治疗中采取中西药结合的联合给药,使患牛的创口在得到消炎、灭菌的同时也增强了牛体的免疫力、促进了伤口的愈合、缩短了患牛的愈后进程。本诊疗方法特异、实用、有效,具有一定的借鉴和推广价值。 参考文献 [1]李秀丽,李祥翠,廖万清.放线菌病的研究进展[J].中国真菌学杂志,2008,(30):189-192. [2]周双清,黄小龙,黄东益,等.Chelex-100快速提取