发酵工程实验-PHA合成2011.pdfVIP

目 录 微生物发酵工程综合实验名称：野生 PHA 合成菌的分离、鉴定、发酵、 固液分离、产物抽提、浓缩、沉淀、结构检测实验 实验 1. PHA 合成细菌的分离与纯化 实验 2. 利用计算机微生物分类鉴定系统进行微生物的分类鉴定 实验 3. 发酵设备的原理及其使用 实验 4. 微生物发酵法制备生物降解材料聚羟基脂肪酸酯（PHA ） 实验 5 发酵液中溶解氧测定、发酵液中基质葡萄糖含量的测定 实验 6. 亚硫酸盐法测定容积氧传递系数 实验 7. 实验型超滤装置的原理及其使用 实验 8. 菌体干燥实验型冷冻干燥机的原理及其使用 实验 9. PHA 的溶剂抽提法及其操作 实验 10. PHA 抽提液的浓缩旋转蒸发仪操作使用 实验 11. PHA 样品沉淀、精制、减压干燥、核磁共振检测样品管的准备 下页为该综合实验的时间安排表 野生PHA 合成菌的分离、PHA 的发酵、固液分离、产物抽提、浓缩、沉淀、结构检测综合实验安排 时间 参与人 实验内容 仪器设备 周四下午 老师 讲解实验，每组配分菌培养基 100ml，于一个250ml 电子天平、硫酸纸、量筒、1000ml 烧杯、Ph 计、洗瓶、卫 (4 课时） 学生 三角瓶内，灭菌。灭菌完毕后倒平板（5 个平板），倒 生纸、试管试管帽、500 ml 三角瓶、胶塞、无菌培养皿、 第 平板时加入 0.2%尼尔红染液以用于挑选 PHA 合成 超净台、灭菌锅 一 菌；每组配100ml 生理盐水，灭菌。 周 分组：3 人×6 组+4 周五下午 老师 每组用已灭菌生理盐水做8 个稀释梯度，进行菌液涂 电子天平、硫酸纸、量筒、1000ml 烧杯、Ph 计、洗瓶、卫 (4 课时） 学生 布，30℃温箱培养48 －96h ；每组配300ml LB，分装 生纸、试管试管帽、500 ml 三角瓶、胶塞、灭菌锅、250 ml 250ml 三角瓶中，灭菌作为二级种子液 三角瓶、玻璃珠、振荡混匀器、涂布棒、超净台、恒温培养 分组：6 人×3 组+4 箱、1ml 移液枪枪头 周一下午 老师 312nm 紫外灯下观察平板上菌落情况，从污泥和土壤 电子天平、硫酸纸若干、量筒、1000ml 烧杯、Ph 计、洗瓶、 种源中各选取比较理想的合成菌1 株，画线培养。 卫生纸、250 ml 三角瓶、胶塞、超净台、接种环、灭菌锅、 第 312nm 紫外灯 二 周三下午 老师 取出培养好的培养皿，挑取单一菌落接种于L 管内进 超净台、无菌牙签、摇床 周 行放大培养 周四下午 老师 312nm 紫外灯下观察平板上菌落情况，将L 管内培养 超净台、移液枪、无菌枪头、摇床 (4 课时） 学生 好的菌液和预备的门多萨假单胞菌分别以 1％的接种 量接种到装有100ml LB 培养基的三角瓶中，振荡培 养。biolog 鉴定所挑选出的菌株。 周五下午 老师 学生分三组，一组配发酵培养液 7L，一组离心三角 电子天平、量筒、烧杯、三角瓶、移液枪、超净台、离心机、 (4 课时） 学生 瓶内菌体，一组对发酵罐灭菌。都准备好了以后接种 离心管、发酵罐 开始发酵 周日下午 老师 结束发酵，放液，装于塑料桶内，搁冰箱备用。 塑料筒、冰箱 周四下午 老师 取出发酵液，学习葡萄糖残留量的检测方法，然后离 葡萄糖检测试剂盒、移液枪、离心机、离心管、培养皿、冷 第 (4 课时) 学生 心菌液，收集沉淀，冷冻干燥菌体，学习超滤。