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武义县高中生物实验技能提升培训（二） 组织单位：县教研室 指导专家： 蓝伟侦 培训内容：几种植物染色体体核型分析 蓝伟侦在作“染色体核型分析”讲座 材料： 表1 紫景天和四种龙葵的性状比较 种类 果实颜色 果实特征 分布区 紫景天 黄果龙葵 少花龙葵 浙江龙葵 苏联龙葵 褐色 黄绿色 亮黑紫色 黑色 黑紫色 果小 ，卵状椭圆形稻种名称 Name of species 染色体数目 Chromosome number 基因组 Genome 分 布 Distribution 栽培稻(O. sativa L.) 非洲栽培稻(O. glaberrima) 疣粒野生稻(O. meyeriana) 药用野生稻(O. officinalis) 宽叶野生稻(O. latifolia) 高杆野生稻(O. alta) 斑点野生稻(O. punctata) 栽培稻×药用野生稻F1植株 BC1植株(栽培稻回交) BC1植株(药用野生稻回交) 药用野生稻单体附加系(MAAL 8) 24 24 24 24 48 48 48 24 36 36 25 AA AA GG CC CCDD CCDD BBCC AC AAC ACC AA+C 全世界 西非 南亚、东南亚 亚洲热带、亚热带、 澳大利亚热带 拉丁美洲 拉丁美洲 非 洲 — — — — Giemsa粉 PI (碘化丙啶)DAPI 生物素化dUTP地高辛化 dUTPSigma公司 Roche公司华美生物工程公司Roche 公司 名称 型号 制造商或产地 光照培养箱 SPX-250B-G 上海博讯实业有限公司医疗设备厂 4℃与-20℃冰箱 BCD-215K 海尔集团 恒温水浴箱 HH-4 金坛市杰瑞尔电器有限公司 架盘药物天平 HC-TP11-2 上海精密科学仪器有限公司 成像处理软件 Photoshop CS 5.0 美国 定性滤纸 GB/T1914-93 杭州新华纸业有限公司 干燥器 - - 显微镜 荧光显微镜 XSP-2CA OLYMPUS BX61 上海 日本 4 主要试剂的配制 ⑴ 卡诺固定液：酒精：冰醋酸=3：1（体积比）4℃冰箱保存备用，作用是迅速杀死细胞，使之在形态上和内部结构上保持生活时的完整和真实状态，并且能将细胞在生活情况下不易观察清楚的结构清晰显现。预处理改变细胞质的粘度，抑制和破坏纺锤丝的形成促使染色体缩短和分散有利于对有丝分裂中染色体的观察和计数。使分生组织细胞间的果胶质分解细胞壁软化或部分分解使细胞和染色体容易分散压平。苏木精染：染色体染上较深的颜色，分色清晰，照像效果较好利于标本长期保存。2ⅹSSC：NaclddH2O，于烧杯中搅拌使氯化钠，柠檬酸钠完全溶解，并混匀，置试剂瓶中保存。 ⑻ Giemsa染液：Giemsa粉0.5g，甘油22ml，将Giemsa粉置于研钵内先用少量甘油与之充分混合，研磨至无颗粒，然后将剩余的甘油混在一起，56℃保温2小时后，加入33ml纯甲醇，保存于棕色瓶内。 ⑼ Sorense缓冲液：Na2HPO4（1/15M）50ml与 KH2PO4（1/15M）50ml混匀，并测pH（pH=7.0左右），作用在于平衡pH值.1紫景天染色体制片及观察 （1）插穗：选择当年萌发枝，剪成6～7厘米长，带顶芽，粗插穗（0.6～0.8）。 用光照培养箱培养：温度20，光照强度为2500lx(6时~19时)，插床选用长方形72孔（6×12）黑色育苗盘，每个孔的长×宽×高为4.5cm×4.5cm×5cm，进行生根培养。 室温培养：插床选用长方形72孔（6×12）黑色育苗盘，每个孔的长×宽×高为4.5cm×4.5cm×5cm，在自然光和室温下进行生根培养。 水里培养：放入装有自来水的容器中，在自然光和室温下进行生根培养。 （2）取样：选取生长状况良好的根尖，切取0.5cm。 （3）预处理：为了有利于对有丝分裂中染色体的观察和计数，在固定之前应对剪下的根尖进行预处理，这样可以改变细胞质的粘度，抑制和破坏纺锤丝的形成，促使染色体缩短和分散。预处理的方法有低温预处理和药物预处理。  低温预处理：将剪取的根尖浸入盛有蒸馏水的烧杯内，置于 4 的冰箱中进行低温处理 24小时，此法效果很好，对染色体无破坏作用，染色体缩短均匀。 药物预处理：常用药物有秋水仙素溶液、对二氯苯溶液、8-羟基喹啉等。 （4）根尖的低渗：低渗是为了使染色体更好的分散。在固定前用0.075mol/L KCl 室温