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四、离心注意事项: Centrifuge Cautions: 1. Make sure the correct rotor is being used and that it is installed properly on the spindle. 2. Balance the load in the rotor - every tube must have a balance tube in the opposite slot with the same volume of fluid. 3. Make sure you are using the appropriate centrifuge tube for the job - they can rupture at too high a speed. 4. Pre-cool the centrifuge and the rotor. Rotors should be stored in a refrigerator. 5. DO NOT attempt to override any safety features of the centrifuge. 6. NEVER leave the centrifuge unattended until it reaches maximum speed and is going smoothly. * 1.离心力的大小是由哪些因素决定的？ 2.什麽是相对离心力？g代表什麽？ 3.离心时间越长是否离心效果越好？ 4.离心一般能获得纯净的样品吗？ 5.离心技术有哪些种类？ * 本章要求： 离心力，相对离心力，沉降速度，沉降系数概念. 相对离心力的计算 影响沉降速度的因素 制备型离心机常用的转子 差分离心法 速度区带离心法及其特点，等密度离心法及其特点 密度梯度离心常用的介质有哪几类 密度梯度的制备方法 梯度的回收方法 * * * 几种分子量测定方法的比较： * 二、制备型超速离心机 （一）制备型超离心机的五大系统 1.驱动系统 2.真空系统 3.恒温系统 4.控制系统 5.润滑系统 （二）制备型超离心机的主要配件 1.转子 （1）角度转子 * （2） 水平转子 * 角度转子 水平转子 离心时间 短 长 寿命 长 短 运转 平稳 低速易摇摆 壁效应 强 弱 适用 差速离心 密度梯度离心 * （3） 区带转子 * （4） 垂直转子 * （5） 连续离心转子 * （6 ）细胞洗脱转子 低速离心时连续分离型转子，最高转速不超过6000r/min 最适于自动植物培养液或发酵液中连续分离单细胞和菌体 * 2.离心管 由管体和盖组件两部分组成 塑料、不锈钢 三、分析型超速离心机 * 与制备用机型的不同点： 1．由于盛液器（离心池）有“光学窗口”，故受材料强度限制，允许转速略低，在80000r.p.m以内使用。 2．转速与温度直接影响测定数据，必须控制很严：转速偏差±1.5‰，温差±0.1℃ 3．附有动态光学检测，数据分析系统。 * 第三节 离心分离的模式 差分离心（离心沉降）、密度离心法（离心分离） 一、差分离心(Differential Centrifugation ) 概念： 差分离心法亦称为“差速离心法”，是依据不同大小和密度的颗粒在离心力场中沉降速度的不同进行离心分离的一项技术。 * 过程是将样品溶液在一定离心力场中离心一定时间使颗粒大组分沉降于管底，上层液再用加大的离心力场离心一定时间，又可获得中等大小的组分。如此依次提高离心力，逐级分离出所需组分，故称其为差分离心法。 * 用途： 差速离心的分辨率不高，沉降系数在同一个数量级内的各种粒子不容易分开，常用于颗粒或密度差别较大的组分的分离，或其他分离手段之前的粗制品提取。 * * 密度梯度区带离心 速度区带离心法 等密度区带离心法 * 二、速度区带离心法(rate zonal centrifugation ) 概念： 又称速率区带离心法或分级区带离心法。离心操作时将样品液置于连续或不连续，线性或非线性密度梯度液上（如蔗糖、甘油、KBr、CsCl等），控制离心时间，使具有不同沉降速度的粒子处于不同的密度梯度层内分成一系列区带，从而达到彼此分离的目的。这种离心方法称速度区带离心法。 * * 特点： （1）介质的密度亦须严格掌握：梯度最大值≤组分最小密度。 （2）样品加于梯度介质的顶部、离心时间须严格控制。 （3）样品的密度＜梯度密度最小值。 （4）分离依据是各组分之沉降系数差。 （5）分辨率受组分沉降系数，离心时间，颗粒扩散系数，介质粘度及梯度