副溶血性弧菌PMA-LAMP方法的建立.pdfVIP

现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2016, Vol.32, No.7 副溶血性弧菌PMA-LAMP方法的建立 1 1 1 1 1,2 马骉 ，吴莹莹 ，戴明雁 ，方结红 ，张明洲 （1.中国计量学院生命科学学院，浙江省生物计量及检验检疫技术重点实验室，浙江杭州 310018） (2.浙江省海洋食品品质及危害物控制技术重点实验室，浙江杭州 310018） 摘要：副溶血性弧菌（Vibrio parahemolyticus ）是一种常见的食源性致病菌，在海鲜等食物中检出率很高，食用没有煮熟的带菌 食物或者腌制品，极易引起食物中毒。目前用以检测副溶血性弧菌的快速检测方法都不能区别死活菌，容易出现假阳性结果。本研究 基于 DNA 结合染料叠氮溴化丙锭（propidium monoazide, PMA ），利用荧光染料钙黄绿素（Calcein ）的特性，建立了一种实时的可视 化环介导等温扩增方法（Loop-mediated isothermal amplification, LAMP ），并与qPCR 方法进行比较。实时可视化LAMP 方法的反应 结果，既可以肉眼直接观测，也可以借助荧光分析设备实时监测，并对半定量分析进行初探，为之后向定量分析深入研究打下基础。 实验结果表明，实时可视化PMA-LAMP 方法的灵敏度可达 5.0×102 2 CFU/mL ，模拟食样灵敏度为 1.9×10 CFU/mL ，与PMA-qPCR 方 法结果一致。除去前增菌时间，整个检测过程只需2 h ，且准确率高，为副溶血性弧菌快速检测的开展提供了有效的技术支持。 关键词：副溶血性弧菌；可视化环介导等温扩增方法；叠氮溴化丙锭；实时荧光定量PCR；快速检测 文章篇号：1673-9078(2016)07-205-213 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2016.7.032 Development of Loop-mediated Isothermal Amplification (LAMP) Assay Based on Propidium Monoazide (PMA) for Detecting Vibrio parahaemolyticus 1 1 1 1 1,2 MA Biao , WU Ying-ying , DAI Ming-yan , FANG Jie-hong , ZHANG Ming-zhou (1.Colleage of Life Science, China Jiliang University, Zhejiang Provincial Key Laboratory of Biometrology and Inspection Quarantine, Hangzhou 310018) (2.Zhejiang Provincal Key Laboratory of Marine Food Quality and Hazard Controlling