巢式荧光pcr结合高分辨熔链曲线检测结核分枝杆菌及其 - 江苏大学.pdf

第２５卷第４期 江 苏 大 学 学 报（医学 版） Ｖｏｌ．２５ Ｎｏ．４ 　 ２０１５年７月 　 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＪｉａｎｇｓｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＭｅｄｉｃｉｎｅＥｄｉｔｉｏｎ） Ｊｕｌ．２０１５ 　 　 　 　 　 　 巢式荧光ＰＣＲ结合高分辨熔链曲线检测结核分枝杆菌及其亚型 １ １ １ １ １ １ ２ 邵雪君 ，朱宏 ，黄莉莉 ，陶云珍 ，徐俊 ，何萍 ，汪健 （苏州大学附属儿童医院１．检验科，２．普外科，江苏 苏州２１５００３） ［摘要］　目的：建立一种检测结核分枝杆菌及其亚型的ＰＣＲ方法。方法：根据人型及牛型结核分枝杆菌硝酸还原 酶（ｎｉｔｒａｔｅｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ｎａｒＧＨＪＩ）基因启动子区２１５位上ＴＣ的转换，设计巢式荧光ＰＣＲ结合高分辨熔链曲线检测结核 分枝杆菌及其亚型，测定其敏感性，并用琼脂糖凝胶电泳验证观察巢式荧光ＰＣＲ产物的特异性。以人型结核杆菌标 准株（Ｈ３７Ｒａ）、卡介苗培养菌液、人型临床分离株和牛型临床分离株为标本，高分辨熔链曲线分析结核分枝杆菌亚型 正态化熔链曲线及熔链温度。结果：巢式荧光ＰＣＲ特异性地检出结核分枝杆菌ｎａｒＧＨＪＩ基因，其敏感性比荧光定量 ＰＣＲ高１０倍左右；人型及牛型结核分枝杆菌ｎａｒＧＨＪＩ基因ＰＣＲ产物的高分辨熔链曲线分成２个不同组合，熔链温度 分别为（８３．０８±０．０８）℃和（８３．９６±０．０９）℃，差异有统计学意义（ｔ＝２１７．２３，Ｐ＜０．０５）。结论：成功建立检测结核分 枝杆菌及其亚型的巢式荧光ＰＣＲ结合高分辨熔链曲线法。 ［关键词］　结核分枝杆菌；巢式ＰＣＲ；熔链曲线；亚型 ［中图分类号］　Ｒ３７８．９１；Ｒ３９３　　［文献标志码］　Ａ　　［文章编号］　１６７１－７７８３（２０１５）０４－０３４２－０４ ＤＯＩ：１０．１３３１２／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１７７８３．ｙ１５００５４ ＮｅｓｔｅｄｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔＰＣＲｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｈｉｇｈｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｍｅｌｔｉｎｇｃｕｒｖｅｔｏ ｄｅｔｅｃｔａｎｄｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓｓｔｒａｉｎｓ １ １ １ １ １ １ ２ ＳＨＡＯＸｕｅｊｕｎ，ＺＨＵＨｏｎｇ，ＨＵＡＮＧＬｉｌｉ，ＴＡＯＹｕｎｚｈｅｎｇ，ＸＵＪｕｎ，ＨＥＰｉｎｇ，ＷＡＮＧＪｉａｎ （１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧｅｎｅｒａｌＳｕｒｇｅｒｙ，Ｃｈｉｌｄｒｅｎ′ｓＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＳｏｏｃｈｏｗＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＳｕｚｈｏｕＪｉａｎｇｓｕ２１５００３， Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａＰＣＲｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓｓｔｒａｉｎｓ． Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＡｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅＴｔｏＣｔｒａｎｓｉｔｉｏｎａｔｐｏｓｉｔｉｏｎ２１５ｐｒｉｏｒｔｏｔｈｅｓｔａｒｔｃｏｄｏｎｏｆｎｉｔｒａｔｅｒｅｄｕｃｔａｓｅｇｅｎｅ （ｎａｒＧＨＪＩ）ｂｅｔｗｅｅｎＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓａｎｄＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｂｏｖｉｓ，ａｎｅｓｔｅｄｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔＰＣＲｃｏｍ ｂｉｎｅｄｗｉｔｈａｈｉｇｈｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｍｅｌｔａｓｓａｙｗａｓｄｅｓｉｇｎｅｄ．Ｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆｔｈｅｍｅｔｈｏｄｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｃｏｍ ｐａｒｉｎｇｔｈｅｑｕａｎｔｉｔａｔ