哈茨木霉丝%2f苏氨酸蛋白磷酸酶基因的克隆表达.pdfVIP

第40卷第lO期 哈尔滨工业大学学报 、，oL，40No-10 2008年lO月 OF Oct．2008 OFHARBININSTITUTETECHNOLOGY JOURNAL 哈茨木霉丝／苏氨酸蛋白磷酸酶基因的克隆表达 刘 燕，杨谦 (哈尔滨工业大学生命科学系，哈尔滨150001，E-mail：yangq@hit．edu．e11) 摘 要：为深入研究丝／苏氨酸蛋白磷酸酶的功能，从哈茨木霉eDNA文库中克隆丝／苏氨酸蛋白磷酸酶 (PP2A)基因，并成功构建到原核表达载体pET28a，在大肠杆菌中表达．表达产物经SDS—PAGE电泳分析， mmol／L 在40．5kDa处出现特异性条带．在22℃以0．5 IPTG诱导时，目的蛋白大部分以可溶形式存在，在 mmol／L 37℃以1．0 1FrG诱导时，目的蛋白则大部分以包涵体存在．全长eDNA序列为1286 bp，5’非编码区 9lbp、3’非编码区237bp，编码327个氨基酸，没有信号肽．本研究为PP2A基因的功能验证奠定基础，以便 进一步研究蛋白磷酸酶的功能，从而获得更多关于哈茨木霉蛋白磷酸酶作用机制的信息． 关键词：蛋白磷酸酶；原核表达；哈茨木霉 中图分类号：F252．8文献标识码：A文章编号：0367—6234(2008)10—1581—05 Gene ofPP2A cloning，prokaryoficexpressiongene fromTrichoderma harziahum LIU Yan，YANGQian Scienceand Institute (Dept．ofLife Engineering，HarbinofTechnology，Harbin o—erto thefunctionofserine／threonine full Abstract：In investigate proteinphosphatase(PP)，thelen昏h eDNAofPP2AwasobtainedfromcDNA ofTrichodermaharzianuln,andtherecombinant library prokaryotic was ex— vector wasconstructed．ThevectortransformedintoEcoliBL21(DE3)．The expressionpET28a fusion anew bandwithmolecularofabout pressedproteinwas肌alyzedbySDS—PAGE，andspecific weiSht 40．5kDawasfoundwheninducedIPIG．The wasdissolublewheninducedat22℃with by targe