结核分枝杆菌rv0394c基因在耻垢分枝杆菌中的表达及其粘附特性的 .pdfVIP

第37 卷 第3 期 中 国 预 防 兽 医 学 报 Vol. 37 ，No.3 2015 年 3 月 Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine Mar. 2015 doi: 10.3969/j.issn.1008-0589.2015.03.09 结核分枝杆菌 rv0394c基因在耻垢分枝杆菌中的表达 及其粘附特性的鉴定 李华芳，曹 俊，刘松艳，陈利苹，刘思国* ( 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/ 动物细菌病研究室，黑龙江哈尔滨 150001) 摘 要：本实验室前期研究鉴定出结核分枝杆菌的rv0394c 基因产物具有透明质酸酶的活性，但对于该酶在 分枝杆菌致病中的作用尚不清楚。为了鉴定该蛋白对细胞是否具有粘附特性，本研究利用大肠杆菌表达纯化的重 组蛋白RV0394c 与人肺泡上皮细胞(A549 细胞) 互作，通过激光共聚焦显微镜观察到蛋白对细胞的特异性粘附。 为进一步验证该试验结果，将rv0394c 基因克隆至大肠杆菌- 分枝杆菌穿梭表达质粒pMV262 中，将重组质粒电 转化于非致病性的耻垢分枝杆菌中进行表达。构建的重组菌与A549 细胞进行互作，结果表明重组菌可以粘附于 A549 细胞表面，而且这种粘附能够被RV0394c 重组蛋白所阻断，这些结果表明RV0394c 蛋白具有粘附细胞的能 力，属于该菌的粘附蛋白之一。RV0394c 蛋白粘附特性的鉴定为进一步研究该蛋白在致病性中的作用提供了实验 依据。 关键词：结核分枝杆菌；rv0394c 基因；pMV262 ；耻垢分枝杆菌；粘附 中图分类号：S852.61 文献标识码：A 文章编号：1008-0589(2015)03-0199-04 ofMycobacteriumtuberculosisrv0394cgene inMycobacteriumsmegmatis LI Hua-fang, CAO Jun, LIU Song-yan, CHEN Li-ping, LIU Si-guo* (Division of Animal Bacteriosis, State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology, Harbin Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Harbin 150001, China) Abstract: In our previous studies, the RV0394c protein of Mycobacterium tuberculosis was identified to have the activity of hyaluronidase, but the function of the protein is unknown. In order to identify the adhesion characteristic of the protein, RV0394c recombinant protein expressed from E.coli were interacted with human lung epithelial (A549) cell and proved to possess the adhesion ability. To further confirm the result, the rv0394c gene was cloned into E.coli-mycobacterium shuttle vector pMV262, and the re