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含硒抗病毒多肽的半胱氨酸缺陷型表达及鉴定
中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology,2014,34(4):1620
DOI:10.13523/j.cb
含硒抗病毒多肽的半胱氨酸缺陷型表达及鉴定
1,2 1 2 2 2
王 程 隋春红 闫岗林 吕绍武 牟 颖
(1吉林医药学院 吉林 132013 2吉林大学分子酶学工程教育部重点实验室 长春 130012)
摘要 目的:在大肠杆菌中进行含硒抗病毒多肽的可溶性半胱氨酸缺陷型融合蛋白的表达,并对
其纯化蛋白进行生物学活性的初步鉴定。方法:将含硒抗病毒多肽SeGBVA10基因克隆到GST
融合表达载体pGEX2T中,转化至半胱氨酸缺陷型大肠杆菌BL21cysE51后进行半胱氨酸缺陷型
表达,通过谷胱甘肽Sepharose4B亲和柱纯化目的蛋白质,并对其含硒量、抗病毒活力等性质进行
初步鉴定。结果:利用半胱氨酸缺陷型表达法成功地可溶性表达了sjGSTSeGBVA10和 sjGST
GBVA10融合蛋白,并经凝血酶切后获得了纯化的SeGBVA10和 GBVA10抗病毒多肽。测定Se
GBVA10的含硒量为0.974mol/molpeptide,GPX活力为47.52U/mol,其EC 为21.73mol/L,
μ 50 μ
CC 为849.41mol/L。结论:SeGBVA10具有与GBVA10相同的抗病毒活性,并具有一定的抗氧
50 μ
化活力。
关键词 硒 抗病毒多肽 谷胱甘肽过氧化物酶
中图分类号 O627.6
元素硒(selenium,Se)是人体的必需微量元素,它 为Sec。本文通过可溶性半胱氨酸缺陷型融合蛋白的
在机体内主要以硒蛋白的形式发挥其主要功能,这些 表达方法,在大肠杆菌(Escherichiacoli,E.coli)中制备
硒蛋白大多数都是氧化还原酶类,参与抗氧化应激相 了含硒抗病毒多肽SeGBVA10并对其进行初步的理化
[12] 性质鉴定。
关的生命活动 。硒蛋白中的硒多数是以硒代半胱
[3]
氨酸(selenocysteine,Sec)的形式存在 。硒蛋白除了
1 材料与方法
[4]
具有抗氧化活性以外,还具有一定的抗病毒作用 。
若在抗病毒多肽中加入硒元素,制备出含硒抗病毒多 1.1 质粒、菌株和细胞系
pGEX2T质粒购自Sigma公司;E.coliDH5 菌株
肽,可能会增加原多肽的抗病毒活性,还使其具有一定 α
的抗氧化活性。 由本实验室保存;半胱氨酸缺陷型表达菌株E.coliBL
21(DE3)selB kancys51E(BL21cysE51)由德国慕尼
抗病毒多肽 GBVA10是以GB肝炎病毒A(GBV ∷
A)的NS5A膜锚定区域氨基末端两亲性 螺旋序列为 黑大学Prof.AugustBck和Dr.MariePauleStrub惠赠。
α
模板,经过抗丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus,HCV)实 含荧光素酶报告基因hRLuc的 HCV复制子细胞系
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