二十种混合氨基酸的质谱鉴定 - 上海有机化学研究所.pdf

化学学报 ACTA CHIMICA SINICA 1994,52, 1112-1117 二十种混合氨基酸的质谱鉴定 直接磷酸化物的正负离子 FAB-MS 分析 尹应武麻远赵玉芬* 辛斌王光辉 (清华大学化学系北京 100084) (中国科学院化学研究所北京 100080) 摘要将二十种天然氨基酸按等摩尔量混合后，用二异丙基亚磷酸酶直接磷酸化，可以高选择性 (96%) 地获得 N-磷酷氨基酸衍生物的掘合物，负离子 FAB-MS 可以原位检出混合物中全部 N-磷酸氨基酸，且准分子离子峰较高，可发展为混合氨基酸衍生物全分析的有效手段.正离子 FAB-MS 则对碱性磷酸化氨基酸的检出更有利. 关键词 氨基酸鉴定，质谱分析，磷耽化氨基酸，正负离子 FAB-MS 1 概述 氨基酸作为构成蛋白质的基石，是一类非常重要的生化物质，氨基酸的合戚、分离、鉴 定及混合氨基酸的组成分析一直是人们感兴趣的研究课题，并且已经有了深入系统的研究， 虽然多种分析鉴定方法已经创立，但都存在一定的局限性.用显色法、 TLC 法及 HPLC 法 存在干扰和漏栓的问题，如组份较多时难以达到理想的分离鉴定效果.质谱法具有用量少 (μg 量)，能立即给出分子离子峰的优点，所以可以方便地指认和鉴定氨基酸和所含杂质.但 由于氨基酸的强极性及难挥发性，用电子轰击源 (EI)，化学电离源 (CI)，场解析源 (FI)均 难以获得分子离子峰.快原子轰击质谱(FAB-MS) 是 80 年代初发展起来的一种有效质谱分 析方法，在氨基酸、小肤、糖类、核昔酸等强极性，难挥发的生化物质分析鉴定中已有广泛 采用.用快原子轰击质谱 (FAB) 灵敏度仍然很低，混合氨基酸中大部分氨基酸均无明显的 准分子离子峰，不能直接分析混合氨基酸的组成.为了提高氨基酸、小肤的灵敏度，减小底 物、溶剂及杂质峰的干扰，不少研究者采用了将其衍生化的质谱分析法，取得了较好的效 果 本研究组发现 N-磷酷氨基酸及肤的衍生物就很有特色，它们的正离子快原子轰击质谱 (P-FAB-MS) 的检测灵敏度比对应的氨基酸高数十倍甚至数百倍。气呈现出很有规律的裂 解特征[3- 坷，磷酷基存在造成的这种显著的增敏效应，使得谱图大为减化，此外这类化合物 所表现出的特布的裂解特征使我们可以多重确诊其母离子或碎片离子;从而进一步保证了结 果的准确性.因此通过氨基酸及小肤的直接 N-磷酷化进而用 FAB-MS 法确定氨基酸组 成、分析小肤的氨基酸序列可能会成为蛋白质分析中的重要手段.本文将要介绍一种既可以 方便地将混合氨基酸几乎定量衍生化，又能通过质谱法对其衍生物直接分析，从而确定氨基 1993年6月 14 日收到.修改稿1994年1 月 3 日收到.本文是得到清华大学校内基金、国家教委青年基 金、国家自然科学基金及北京中关村大型仪器联合测试基金资助的课题. A 化学学报 ACTA CHIMICA SINICA 1994 1113 ‘ 酸组成的方法. 2 混合氨基酸的直接磷酷化反应研究 本研究组首创了二皖基亚磷酸醋在水体系中一步直接合成氨基酸及小肤的 N-磷酸衍生 物的方法. (RO) .P(O)民+NH .CH(R 1 )COOH+CCI. NEt~-H.O-CIH ， OH (RO) IP(0)NHCH(R 1 )COOHNEt~ 。-5C .. DIPPH ..(1-20) DIPP-u (1 -20) + (RO).P(O)NHCH(R COOH