与海水养殖相关的细菌多样性的分析及方法评价.pdfVIP

量堡查鲞堕塑茎塑塑堕圭堡堡塑塑壅!燮堡!堑一一一 与海水养殖相关的细菌多样性的研究及方法评价 摘 要 为了探索微生物区系与养殖动物疾病的关系，进一步加强对海水养殖生物 病原学的认识，更好地对疾病进行诊断，我们研究了两个育苗场不同发育期的 中国对虾(Pchinensis)幼体和仔虾体内的异养菌和弧菌种群变动的动态过程。 以典型特征法、BIOLOGGN法、数值分类法对菌株进行鉴定。结果表明，对虾 幼体样品中所分离的细菌。大多是革兰氏阴性杆菌，经鉴定为假单胞菌属 溶藻胶弧菌(Vibrio atginoIyticus)和哈维氏弧菌(阳brioharveyi)。在对虾幼体 对虾幼体的发育，在以后的发育过程申，弧菌(Hbrio)成为优势，其中溶藻胶 弧菌(1,qbrio n堙inolyticus)和哈维氏弧菌(Vibrioharveyi)优势明显。且二者的 消长与菌期病害的发生相关，溶藻胶弧菌总是在虾苗健康时出现或成为优势， 而啥维氏弧菌成为优势时，苗期病害容易发生。从而揭示了育苗期中国对虾 (Penaeus chinensis)幼体中可培养的募养细菌区系及其变化与病害发生的关系。 在上述研究基础上，采用BIOLOG．GN细菌鉴定系统，分析了来自5个国 家的4个养殖对虾品种菌期及部分养成期虾体的1 85株弧菌(分别分离自对虾 健康状态及发病期间)。结果表明，来源、种类不同的养殖对虾苗期的主要弧菌 组成相似，溶藻弧菌(}qbrio 在的种类，同一种对虾在不同地区养殖，其区系组成略有差异。通常哈维氏弧 致病菌。在健康虾苗和发瘸虾菌体内都可分离到溶藻弧菌(矿alginolyticus)。因 此，可以说明以中国对虾为研究对象得出的结论具有普遍意义。 为探索海洋环境中可培养细菌多样性的规律，直接比较研究了水产养殖、 工业污染对海洋细菌多样往的影响。我们在1999．2000年间研究了青岛避岸代袭 性海区(养殖密集区、工业污染区、无污染区)不同样品中的异养菌(革兰氏 阴性菌)的区系组成，对从青岛沿岸的养殖密集区、工业污染区、无污染区不 同月份分离的428株革兰氏阴性缨菌，用BIOLOG，GN法进行了鉴定，其中t06 株菌对BIOLOG．GN板的95种碳源反应结果全部为阳性或阴性，而其余的322 的322株菌进行4种比较分析：l，待测菌株、参考(或标准)菌株与BIOLOG．GN 一一 量塑垄蕉堕塑茎塑垫堕墨壁丝堕曼壅垄查鎏堡竺 数据库eB较；2．凝攥95耱碳源反蔽结柴邀季亍聚类分磬芎；3．聚类分析结莱穹标 准蕊株(27株)、BIOLOG—GN鉴定结果的魄较：4．根据聚类分橇结果，进行缨 赣多样性评价。同时，也对BIOLOG．GN技术进行了评馀。 以上研究表明，在近岸海水环境中，弧菌是可培养细菌中的优势种群。目 前，对弧菌科多样性的研究越来越集中到病原种类上，研究中发现弧菌科中仍 然有很多种群还没有被描述。AFLP方法在细菌属的多样性研究、分类学研究和 系统发育学研究等方面越来越起到非常熏要的作用，于是出现了AFLP方法对 弧菌科菌株(其中76％来源于海水养殖环境)遗传多样性的报道，其中有～些 尚未定种群(即与现存的己定名的菌株不在一群中)。对此，我们选择了不能与 现有的孤菌标准菌株或参考菌株归入同～类群的部分独立累籁，依据其16s 哟INA全序列与标准菌株的比较结果，确立这些菌株在弧菌系统发育树中的地 位，找毒亲缘关系最近的己知种的标准弧菌，并与之进行DNA．DNA杂交，迸 ～步确立这些聚簇的分类地位，以发现弧菌新的耱类。研究结果表弱，聚簇A{、 C21330 A3、A5、A8、A23、A5l、A52与A53、A55、鬣株毛醚G21329、菌株LMG 避行了袭型特铤螅测定，包括月鹭黪酸缓成、不凰碳源约裂题或发酵，以及弧菌 xui 21329命名为I砰brio 额种的食名与描述。A23愈名为强brio sp．nOV．，LMG