乌司他丁对大鼠肾缺血再灌注损伤保护作用的分析.pdfVIP

逝丝厶堂亟±婴荭生堂焦论塞 ．曼旦丝工盟厶鼠竖丛查要灌注塑鱼堡控往坦的婴宜 乌司他丁对大鼠肾缺血再灌注损伤 保护作用的研究 x‰2| 浙江大学医学院外科学(麻醉专业) 99级硕士研究生陈聪聪 导师柳子明 一 中文摘要 (前言：临床上因肾缺血导致急性肾功能衰竭十分常见，一些复杂 的肾脏手术，如’肾实质切开取石术，肾肿瘤的’肾部分切除术，暂 时阻断肾脏血流是必要的。如何减轻和预防肾脏缺血再灌注损 伤，一直是人们对肾损伤保护的主要研究课题。传统观点认为急 性肾衰是肾小管上皮细胞坏死的结果。然而，不断积累的证据表 明，无论离体或体内急性缺血性肾损伤动物模型中存在细胞凋亡 的机制。Bcl．2基因编码一个分子量为26KD的蛋白，借助C端疏 水区主要定位于线粒体外膜上，直接影响线粒体膜的功能，防止 细胞凋亡一切早期征象的发生，在细胞凋亡中起重要作用。热休 70)是生物在进化过程中保存下来的一组细胞内 克蛋白70(HSP 蛋白质，可促进缺血再灌注损伤时自由基和细胞内钙超载引起的 变性蛋白质的修复。为了保护缺血再灌注损伤后器官形态和功能 的完整性，学者们已采取许多措施，如药物诱导产生热休克蛋白 以及用药物抑制细胞凋亡来减轻组织损伤。乌司他丁是一种，。谱 酶抑制剂，对多种脏器具有保护作用。在肾脏缺血再灌注损伤中 弋／ 有无保护作用，以及其作用机理目前尚不清楚。／ 目的：本研究应用夹闭大鼠双侧肾蒂造成肾缺Jf『L再灌注损伤模 堑些厶堂亟±监塞生堂位迨塞 皇虽焦』：盟厶基。垃熊堕豆壅连塑鱼堡坦笠盥的监塞 型，通过检测缺血后血肾功能，结合常规病理检查，以及应用免 疫组化方法进行肾组织标本bcl．2和HSP70检测，并行透射电镜 检查肾组织超微结构，来探讨乌司他丁对肾缺血再灌注损伤的保 护作用及作用机理。 方法：一、实验动物与试剂 只，由浙江省医科院动物中心提供，鼠抗bcl一2单克隆抗体及鼠抗 HSP单克隆抗体均购于福州迈新生物工程有限公司。乌司他丁由 广东天普生化医药股份有限公司提供。 二、动物实验 1、动物分组，、(75只sD大鼠随机分为3组，每组25只，假 ＼ 手术组(C组)，缺血再灌注组(I组)，乌司他丁治疗组(U 组)，每组又根据再灌注时间的不同，分为Oh、2h、6h、12h、 、／ 24h五个时点，每个时点5只大鼠。厂 ， 2、动物模型的制作≥、、旧4∥L氯胺酮50mg／kg腹腔注射麻 醉，尾静脉置管，C组、I组静注lml生理盐水，u组静注1．25 万单位乌司他丁。随后接微泵持续输注生理盐水，速度为 1，Oml／1009／h。行腹部正中切口，静注生理盐水或乌司他丁半小时 后，u组和I组大鼠无损伤动脉夹阻断双侧肾蒂，造成双肾缺 血，45分钟后松开动脉夹，实行再灌注。夹}if：J和松开动脉夹时腹 腔内均保留林格氏液2ml／1009。再灌注当时静注生理盐水lml(I 组和c组)或乌司他丁1．25万单位(U组)。缝合切口，自由摄 肾，福尔马林固定，常规石蜡切片，以备常规染色和免疫组化 用。心脏取血3ml，备血肾功能检查。切取再灌注24h大鼠左肾 的1／3，固定于2．5％戊二醛磷酸缓冲液中，行透射电镜检查。假 2 逝丛厶堂亟±硒塞生堂位逾塞 里司丝．』：盟叁鼠竖丛鱼基灌注塑鱼堡垃在出盥婴宜 手术组以相同手术方法暴露双侧肾脏并分离肾周组织，不夹闭双 侧肾蒂，其处理与缺血再灌注组相同。)／ 三、观察指标 1、肾功能检查用酶法测再灌注各时点血BUN、Cr。 2、HE染色福尔马林液固定左肾组织，常规石蜡切片，作 HE染色，在HB一2型Olympus光学显微镜下观察其组织学改变。 按paller标准评分。 3、Bcl．