印楝（Azadirachta indica）种仁中印楝素的提取及其杀虫活性分析.pdfVIP

印株稃f=中印楝素豹捉敬极其杀虫活／I：研究——拍婴 印楝(Azadirachtaindica)种仁中印楝素的提取 及其杀虫活性研究 生物化学与分子生物学专业：李永红 导师：杨光伟副研究员 一、摘要 f随着化学农药的大量使用，出现了意料之外的情况。由于单一地大量使用化 学农药，害虫、病菌经过自然选择，逐渐产生了抗药性；同时也造成了对环境的 严重污染；农药残留对人类的健康和生命构成威胁。所以现在世界各国都在致力 于发展无公害的生物农药。其中印楝质农药是目前极有发展前途的植物源生物农 药，印楝质生物农药以其优秀的杀虫特性逐渐赢得了重视。印楝(Azadirachta indica,A．Jus$)中的主要杀虫活性物质印楝素的结构和杀虫活性已经得到比较深 入的研究，印楝素为主要的杀虫活性物质，已证明其对8目(鳞翅目、同翅目、 双翅目、鞘翅目、缨翅目、膜翅目、直翅日、蜱螨日、近40n种农林、仓储、卫 生害虫具有拒食、忌避、干扰生长发育、影响产卵等生物活性。印楝农药在环境 中无残留，对环境友好，而且对有益生物安全，对人类及哺乳动物无害。另外在 研究中发现印楝提取物对一些细菌和真菌性病害，以及病毒具有防治效果。 在印楝种仁中印楝素的含量最高，所以种仁是目前提取印楝素的主要原料。 在以往的研究中，由于提取印楝素的技术主要是针对提取高纯印楝素，而很多方 法不能够应用于印楝农药的生产和制备。虽然国外也有一些专利形式出现的提取 方法，但仍然存在一些不足之处。针对这些情况，I本实验对印楝素的提取方法做 了研究，选择提取效果较好的浸提溶剂和萃取溶剂。研究中发现，用正己烷去脂． 用甲醇浸提出印楝素，再用萃取溶剂CCI．和石油醚混合溶剂萃取出印楝素之外的 大量非极性物质，再用乙酸乙酯萃取，萃取物用硅胶柱层析去除糖类、蛋白质等 极性物质，从而得到含量较高的印楝素提取物。而且在研究中发现用正己烷处理 能够使提取物迅速干燥，从而得到一种淡黄色干燥粉末，印楝素含量经HPLC定 量为21．3％。这种印楝素产品物性好，印楝素含量高，适合于制各印楝质农药。 这种印楝素产品的产率为0．76％，折合的印楝素产率为O．17％。对生产成本估算 得到，生产1吨印楝素干粉的成本为46_38～65．70万元人民币。这种提取方法在 (125．20～177．35万元人民币)，而且也优于其它一些已报道的提取方法。 ／由于在印楝农药的生产中，印檬紊韵含量一直是制刺的标准，但用这种标准 西南农业夫学2003^j鼹?{“#收论文 生产出．的印穆杀虫利活性有很大的差异。这是医为与印楝素结构相近的柠檬苦素 类物质(AZRL)也具有一定的杀虫活性。实验改进了一种用比色法测定印楝种仁 提取物中柠橡苦素类物质的总含量的方法：通过对比色法中的各个因素优化，最 Dai et．a1． 的方法相同。但浓硫酸加入量(O．9m1)、反应苷寸f面(10min)以及总的比色溶液 体积(扩大为两倍)都不同。用比色法测得印楝索产品中柠檬苦素类物质(包括 印楝素)的含量为81，35％，可见印楝素产品的活性成分含量很商。用这种方法可 以很简便的测定出样品中柠檬苦素类物质的含量。 在对印楝提取物的杀虫效果的实验中，试虫菜粉蝶幼虫以及供试家蚕都表现 出很明显的印楝素中毒的特征反应。取食明显减少，身体皱缩、麻痹，生长发育 滞后，最后虫体变黑死去。对3龄家蚕印楝素产品在0．04备乙．1、0．089．L‘、0．t69．L‘1 浓度处理后5d死亡率分别为76．2％、92．O％、100％。对菜粉蝶(Pierisrapae) 幼虫在Q．059．L一、O．19．L～、O，29。L．1浓度处理后8d死亡率分别为24％、44％、68％。 二氯甲烷萃取物在O．89．L_l浓度时对3龄菜粉蝶(Pierisrapae)处理6d后死亡率 为52％，但4，5龄幼虫为12．5％。在对高龄菜粉蝶幼虫的实验中发现，化蛹率达 75％，印楝紊不能够阻止高龄幼虫化蛹。所以印楝农药对低龄幼虫具有较好的防 治作用。另外发现印楝农药一般在2d以上才能够发挥效用。／．-一