- 1、本文档共34页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
- 6、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
原肌球蛋白对血管平滑肌细胞游走能力影响的分析
漂瓤球蛋螽对惑篱平淆虢缀蕊游蠢麓夯嚣璃熟繇究
颈±错髓垒: 徐 辫
鬻譬激爨; 李里警 教授
豢零拳缝; 枣滨一鏊 鼗鬟
熊答蘩之 翡手
专逝愈称: 药理攀
攒 要
霪游;
蕊骶炼措咎㈣om粥$讯,蝴∞蹩勰海收瓣撼糕巾翁一释谖繁黼融。零谍题将
弼As繇G姆s,誉程探讨{戳辫淑营警涝魏绥魏ⅣS馘e≥潜轰耱力魏瓣螨,渔臻素孚
溪魏孛蘸瓿漆釜窭魏委熏菏姆瓣楚;
煮法鸯戆蔡:
一+澄囡重组hsHlT聪”薛
慕黼瓣焱}c爻技术,扶入燮勘辣国N森文辩举扩增瓠m弱4-§嬲躞瓣A鬟静
基闼片墩,用dGI狰和T4聃》淑聚合酶修铘;穰逆转录病毒载体pL黼蕊础上正翱
囊天矗s礞辩峨l冀羧鬻建蓑然登毛器.瑟,嚣羧熬鞭惑鎏蓦妻静鑫黧誊如戮漕惩;鬟
戆藜嚣帮蔑蘩经羹鬟萋揍鼹;登忍簿嚣淀煞程蕊,攫a爨髑美蜡魏曲垂菝蘩楚
诧斌裁狳扶骧瞻蠢睃中鼹撼黼A,最后奁DN点遂接酶佟焉下,游魁船蚺艇零瓣
D辩A转他入感受态大弱栉黼觏lo心。撼孛。爨缴壤牧按矮粒魏小燃蠛制餐熬酸裂
黧臻掇戡黎缝纯盖,焉羰裂黢鼹壤酶麟验巍獒垒长,襄耗囊方法羧诞蒸彗A
嚣鼗。爨慕爨暴熏爱綦天法霹淡实囊甄嗣溯黪蒸露耋鏊;蠢麓凝《表S嚣鏊嚣
分褥太平潇瓢聪襄璃警瓣飘张l簿e糯晴A羧营裴序瓢,袋勰=畿辩舔性运
84,7%。
二.黼麒滞M.B霾组体|I_白转淤和表达
参燃邋转最瘸霉基嚣黪姆絷嚣袭这莲溪手麟,鼗鞠程搬襄s穰燃黼粼憋壤葬
凌擎分翳嬉器夫鏊鬻藜囊§躺霸晓舞;蠢夫瓣拣凌豪警嚣嚣鼷黪瓣鲻蹶至
第三健t灞G巅确os‘黼蠛襞粪挺辫试帮鑫,祷氧鳓狳拳雾萋维j霪粒瓯辩哦Sm蕊T骣窭
和禽帮凇强绿色荧光蛋翻郴黻P)cDNA瀚然艨髓粒pL国.E铡p分剐转染避
蛋白转染试剂盒将鸡胃平滑肌原肌球蛋白(gTM)转染进hsmTM—p/As反义表达组
B10t法检测。
细胞中。蛋白表达用westem
三.Westem
Blot分析
膜上,用westemblot法分析TM表达。PDvF膜用5%脱脂奶粉封闭液过夜后,
以兔抗原肌球蛋白多克隆抗体为一抗(1:1000),抗兔免疫球蛋白抗体为二抗
(1:5000),结果显示以纯gTM为标准,与对照组和EGFP表达组相比,基因重组后
肌原肌球蛋白(smTM),并随gTM蛋白转染量增多smTM表达增多。
四.VSMC游走测定
Chanlber方法测定vSMC的游走,聚碳酸盐滤过膜使用前以
用Boyden’s
移至二氧化碳孵箱中,37。C孵育5小时。随机选取四个400×高倍视野(4HPF)内
游走细胞平均数评估细胞游走能力。
反义表达组细胞游走能力明显增强(Po.05)。细胞的随机游走能力在hsmTM.p基
hsmTM—B基因敲除对细胞游走的刺激作用消失(Po.05)。
结论
人平滑肌1M.p和鸡胃平滑肌TM.p的cDNA核苷酸序列的同源性达84.7%。
反插入法可实现hsmTM.B的基因重组,westernblot证实hsmTM基因敲除。
Boyden’s
下hsmTM.B基因敲除后CASMC的游走能力均增强。
blot
关键词:原肌球蛋白 血管平滑肌细胞游走 基因重组 westem
Ch啪ber
Boyden’s
SmOOth
Effectof onVascular
The TropOmyosin
Cell
Muscle
M191.a重lO珏
您可能关注的文档
最近下载
- 立体图形复习(六年级数学总复习).ppt VIP
- 毛概说课市公开课一等奖省赛课微课金奖PPT课件.pptx VIP
- 公安院校公安专业本专科招生政治考察表(2022年西藏报考公安院校公安专业招生).doc VIP
- 2021年电大财务报表分析网考试题答案.docx VIP
- 六年级数学毕业总复习.ppt VIP
- HGT 2160-2024《冷却水动态模拟试验方法》.pdf
- NB_T33004-2013电动汽车充换电设施工程施工和竣工验收规范.pdf VIP
- 02S404 防水套管国标规范.pdf VIP
- 部编人教版五年级下册语文 习作:漫画的启示 重点习题课件.pptx VIP
- 02S701 砖砌化粪池图集标准.docx VIP
文档评论(0)