抗P-选择素单克隆抗体对大鼠胰腺缺血再灌注损伤的作用实验分析.pdfVIP

中文摘要 目 的 胰腺移植是目前治疗糖尿病的根本性措施之一。移植前，供 胰需要切取和保存，因而缺血再灌注过程在所难免。防止缺血再 灌注损伤是移植胰腺成活的关键步骤，也是目前研究的热点。缺 血再灌注损伤的机制虽然尚未完全阐明，但是其和炎性因子的表 达密切相关。P一选择素的激活就是启动诸多炎性因子的重要环 节。目前的实验多侧重于阻止某一方面的炎性介质，效果有限。 本实验采用Ps单克隆抗体阻止Ps的作用，阻断炎症的起始环节， 抑制炎性因子的瀑布反应，从根本上阻止了胰腺的缺血再灌注损 伤。缺血再灌注损伤得到有效的抑制，也就意味着移植胰腺术后 并发症的减少，对移植胰腺的存活和功能有重要的意义。 实验材料与方法 一、实验材料 1．实验动物： 雄性Wistar大鼠，200±209，由中国医科大学动物中心提供。 2．仪器和药品 显微外科器械 普通冰箱 超薄切片机 OLYMPUS双目显微镜及图像分析仪 Ps单克隆抗体，购于苏州医学院 Ps、ICAM一1、TNFct单抗及试剂盒，购于博士德生物公司 二、实验方法 -1· 1．标本采集： 本实验采用胰腺缺血再灌注模型，将所用大鼠随机分成假手 术组、缺血再灌注组及Ps单克隆抗体处理组，每组15只，每组又 根据三个时段各分5只。开腹后，找到脾下动脉。假手术组不做 处理；再灌注组夹闭30分钟后再灌，分别于15、30、60分钟后取 材；实验组在再灌前5分钟经阴茎背静脉注抗Ps单克隆抗体。三 组取材后用PBS配制的10％甲醛液固定。 2．观察指标：将所取标本制成蜡块，切片。 2．1 HE染色：将各组各时段组织染色并观察组织结构。二 甲苯I、Ⅱ、Ⅲ，脱蜡；梯度酒精入水；苏木素染色，冲洗后人75％ 的盐酸酒精分色；返蓝后，伊红染色；梯度酒精脱水，二甲苯透明， 中性树脂封片。 2．2免疫组化：显示Ps、ICAM一1、TNFct的表达情况，并将 所染玻片放在显微图像分析仪上收集数据。 三、数据处理 采用SPSS10，0软件进行数据处理，对假手术组、干预组和缺 血组的不同时间点积分光密度值进行方差分析。 实验结果 一、组织形态： 假手术组和实验组各时段胰腺结构损伤均不明显，再灌注组 胰腺组织变化较明显且随再灌注时间的延长而加重。再灌注15 分钟组织肿胀界限不清，胞浆内可见粉染颗粒，血管扩张、淤血；再 灌注30分钟组织有灶状坏死，核溶解；再灌注60分钟可见组织大 片坏死。 ‘ 二、免疫组化： 观察Ps、ICAM—l、TNFct三个指标。统计分析结果为假手术 ．2· 组与实验组组间和组内差异均无统计学意义(P0．05)，而缺血 再灌注组与假手术组和实验组均存在组间差异(P0．05)，且组 内亦有显著差异(P0．05)。‘ 结 论 1．Ps、ICAM一1及TNFe‘随时间延长而表达增加。 2．Ps可能是缺血再灌注损伤的起始因素。 3．抗一Ps单克隆抗体对缺血再灌注损伤的胰腺有保护作用。 关键词：大鼠；胰腺；Ps，抗一Ps单克隆抗体 ·3· The ofeffectof anti—P—seleetin study monoclonal antibody in the ofrat preventingischemia／reperfusioninjury pallcreas