3．培养基3．引言.pptVIP

2 植物组织器官培养 2.1 器官的形成 植物组织器官培养是以植物细胞全能性为理论指导，在组织及器官水平上开展的研究。 2.1.1 愈伤组织的形成特点 愈伤组织是一团没有分化的可以持续旺盛分裂的细胞薄壁团，是组织培养过程中常见的一种组织形态。 愈伤组织形成经历的三个阶段： （1）启动期 是成熟组织在各种因素诱导下细胞内蛋白质和核酸的合成代谢迅速加强的时期。 （2）分裂期 细胞经过诱导期准备后，细胞数目不断增殖的时期。 （3）分化期 出现形态和生理功能上的变化，最终出现瘤状结构和微管组织的时期。 2.1.2 影响愈伤组织培养的主要因素 (1) 外植体 (2) 基本培养基配方 (3) 激素组合 2.1.3 器官分化与植株形成 (1) 细胞分化与组织分化 随着愈伤组织的生长, 形成了一些新的细胞类群, 主要有薄壁细胞、分生细胞、管胞细胞、色素细胞等， 随着更进一步的发育，出现了微管组织的分化，同时在松散的愈伤组织内出现大量类分生组织及瘤状结构。 （2）器官水平的分化 植物离体培养中器官分化有二种情况：一种是直接从外植体细胞上形成器官原基后发育成器官；另一种是先形成愈伤组织后分化成不同的器官原基。 组织培养中最常见的器官是根和芽。芽原基为外起源，多数起源于培养物的浅层表细胞，根原基为内起源，多发生于组织的较深层。 2.1.4 外植体的器官发生途径 (1)腋芽萌发 外植体的侧芽直接萌发，变异率较小,在优良品种快繁中起着重要作用。 (2)不定芽发生 分为直接不定芽和间接不定芽,前者指不经愈伤组织阶段, 直接从外植体上产生不定芽; 后者指外植体先脱分化形成愈伤组织, 再分化形成芽器官。 (3)体细胞胚胎发生 体细胞胚胎发生有直接途径和间接途径两种。 2.1.5 影响器官分化的因素 (1)培养基成分 (2)环境条件 (3)培养材料 2.1.6 试管苗的驯化 为了提高试管苗移栽成活率, 在露地移栽前, 需对试管苗进行驯化,使其完成由“异养”到“自养”的过程。 提高试管苗移栽成活率的措施：(1)培养壮苗；（2）选择合适的移栽基质；（3）注意移栽方式；（4）加强后期管理。 2.2 根的培养 2.2.1根的无性繁殖系建立 根无性繁殖系的建立有二种方法: (1) 将所选种子进行表面消毒, 在无菌条件下萌发 ,待根伸长后切取成1.0cm大小作为外植体; (2) 剪取植物正常生长的根系, 经一系列消毒措施，建立外植体。 2.2.2 提高离体根生长速度的措施 (1) 选择适合离体根培养的植物材料 (2) 确定合适的培养基配方 (3) 采用合适的培养条件 2.3 离体叶培养 离体叶培养包括叶原基、叶柄、叶鞘、叶片、子叶等叶组织作为外植体的无菌培养。离体叶培养在植物器官培养中占有重要地位。 2.3.1 叶原基培养 采用休眠期的顶芽, 剥去一部分鳞片后, 用次氯酸钠、硝酸银等消毒剂进行表面消毒，用无菌水漂洗后切取柱状叶原基进行培养。 2.3.2 叶片组织的脱分化和再分化 (1) 叶组织分离与消毒 (2) 选取培养基配方 (3) 在适合条件下培养 2.4 胚培养 2.4.1胚培养的意义 (1) 用于胚的挽救 远缘杂交是植物育种的重要途径之一。但杂交后合子胚常常发育不良，表现中途败育。而且幼胚人工离体培养在遗传学研究和育种工作中具有重要意义。 （2）打破种子休眠 通过幼胚培养打破种子休眠可提高休眠种子萌发率，缩短育种周期。 （3）克服珠心胚的干扰 克服珠心胚的干扰，提高多胚性植物杂交育种的效率。 （4）诱导胚状体及进行种子活力测定 2.4.2 胚培养方法 胚培养包括二种方法: (1) 成熟胚的培养 (2) 原胚的培养 原胚指未成熟的胚。在原胚培养中应注意：1） 选择合适的基本培养基;2）注意添加生长调剂剂及附加物 2. 5 胚乳培养 胚乳是被子植物受精后的产物之一, 是由两个中央极核与一个精核结合而成的三倍体组织。 在大多数植物中, 随着胚的发育, 胚乳常常被消耗殆尽。 由胚乳培养的植株的染色体2/3来自母本，1/3来自父本，作为倍性育种和研究遗传规律的材料很有价值。目前，胚乳培养已获得多种园艺植物的再生植株，如柑橘、枇杷、猕猴桃、苹果、梨等。 2.5.1 胚乳培养的方法 (1) 选择合适的胚乳发育时期 植物双受精完成后，胚乳组织的形成发展过程首先是形成游离的胚乳核（游离核型期），其次发育产生细胞壁（细胞型期）。 实践证明：游离核型期材料难以培养，而细胞型期的材料容易成功。 （2）采用合适培养基配方进行愈伤组织诱导