散发性大肠癌抑癌基因FHIT与错配修复基因表达关系的分析.pdfVIP

中文掖兵 散发性大肠癌抑癌基因FHIT与错配修复基因裹达 关系的研究 摘 要 目的。大肠癌是一种常见的消化道恶性肿瘤，其发病 机制至今尚未完全明了。从分子生物学角度讲，大肠癌的 发生是一多基因、多步骤的累积过程。近年来人类错配修 mismatch 复(human repair，hMMR．)基因异常诱导的肿瘤 发生引起人们的广泛。人类错配修复基因是与细菌和酵母 同源的在DNA复制出现错误时起修复作用的一组基因， 后可使DNA复制错误增加，不但会引起广泛的微卫星不 稳定性(microsatellite instability,MSI)，而且促使某些原 癌基因和抑癌基因中的突变快速累积，从而诱导肿瘤发 生。MMR基因异常与多种人类肿瘤关系密切，其中包括 大肠癌。据研究报道，MMR基因的突变与绝大多数遗传 性非息肉性大肠癌(hereditary colorectaI nonpolyposis colorectal cancer,HNPCC)和部分散发性大肠癌(sporadic cancer,SCC)密切相关。目前已知在大肠癌中主要发生突 变的MMR基因是hMLHl和hMSH2。脆性组氨酸三联体 histidine (fragile triad，FHIT)基因是近期被公认的一种抑 癌基因，它位于染色体3p14．2，在多种肿瘤中存在异常。 有报道称FHIT基因的异常可能与MMR基因的改变有关， FHIT基因可能是MMR基因功能异常后受其破坏的～个 靶点。 ． 中文摘要 本研究旨在探讨散发性大肠癌FHIT与MMR基因蛋 白表达之间有无相关性，以进一步探讨大肠癌的发病机 制。 方法：本实验50例大肠癌组织标本均取材于河北医 科大学附属第二医院和第四医院2002年2月至2002年7 月的大肠癌手术切除的大体标本，所有标本皆经过病理诊 断为大肠癌。按Bethesda(1．3)标准，排除HNPCC患者， adenomatous 也排除家旅性腺瘤样息肉病(familial poly— posis，FAP)患者，选取散发性大肠癌患者。本组大肠癌 患者，男28例，女22例；患者年龄从33至82岁，平均 年龄57．2岁；50个病例按病理类型分为：腺癌42例，黏 液腺癌7例，印戒细胞癌l例；按肿瘤的生长部位为：右 侧大肠癌12例，左侧大肠癌38例：按肿瘤组织的分化程 度为：高分化癌10例，中分化癌29例，低分化癌11例； 按Duke’s分期为A期23例，B期13例，C期14例。 分别取手术切除的新鲜肿瘤组织及切口边缘的正常／ 非瘤组织，所有组织标本取材后皆投放于4％多聚甲醛溶 液中，在4℃冰箱内固定24小时，然后组织标本经常规 梯度酒精脱水一石蜡包埋—连续石蜡切片—船染色和SP 法免疫组织化学染色。其中免疫组织化学染色严格按照 sP试剂盒的步骤进行。三种一抗的浓度分别为：兔抗人 FHIT多克隆抗体(北京中山公司)是l：100；鼠抗人 MSHl单克隆抗体(华美公司)为l：50；兔抗人hMSH2 多克隆抗体(北京中山公司)为l：50。三种基因FHIT、 hMLHl、hMSH2蛋白的免疫组织化学染色反映了三种蛋 白的表达情况。用正常／非瘤组织标本作为自身内部阳性 中文摘要 对照：用o．01mPBS(PH7．4)缓冲液代替一抗，作为阴性 对照。用卡方检验和四格表确切概率法对结果进行统计学 分析，检验水准d取0．05，P0．05有统计学意义。 结果s①免疫组织化学染色结果显示，所有正常月}瘤 蛋白在组织细胞的胞浆中表达，而hMLHl和hMSH2蛋 白表达于细胞核中。(墓)FHIT蛋白的染色分别从染色强度 和阳性细胞百分比两方面的综合情况进行评分。评分为 9．12分的有1l例，评分为5-8分的有16例，评分为0-4 分的有23例，评分为0-4分的为FHIT蛋白表达明显减低