第七课花药和花粉培养.pptVIP

第七章 花药和花粉培养 【学习目的要求】 1.掌握花药培养和花粉培养的区别 2.了解花药最佳接种时期 3.掌握花药培养的大致过程 4.掌握花粉培养的大致过程 5.掌握雄核发育的四种途径 第一节 概述 花粉培养和花药培养的概念：都指离体培养花药和花粉，使小孢子改变原有的配子体发育途径，转向孢子体发育途径，形成花粉胚或花粉愈伤组织，最后形成花粉植株，并从中鉴定出单倍体植株并使之二倍化的技术。 二.花粉培养和花药培养的区别 花药培养其外植体是植物雄性生殖器官的一部分，就培养方法和技术来讲，属于器官培养的范畴。 花粉培养的精确定义是：将处于一定发育阶段的花粉从花药中分离出来，再加以离体培养。有时花粉培养也称为小孢子培养(microspore culture)。从培养方法和技术方面来讲，它属于细胞培养的范畴。 三．单倍体植物的特点 所谓单倍体(haploid)是指具有配子体染色体数的孢子体(植物个体)。 diploid 植物其haploid即为monoploid玉米 2n = 2x = 20 n = x = 10水稻 2n = 2x = 24 n = x = 12柑橘 2n = 2x = 18 n = x = 9tetraploid植物其haploid为dihaploid马铃薯 2n = 4x = 48 n = 2x = 24陆地棉 2n = 4x = 52 n = 2x = 26hexaploid植物其haploid为triploid普通小麦2n = 6x = 42 n = 3x = 21octoploid植物其haploid为tetraploid草莓 2n = 8x = 56 n = 4x = 28  四.单倍体的应用潜力 1.迅速获得纯合型材料，缩短育种年限； 2.获得育种中间材料； 3.突变体选育； 4.体细胞融合； 5.作为遗传工程受体更为有效 6.是研究减数分裂，花粉生长机制的生理、生化、遗 传等基础理论的最好方法。 第二节 花药与花粉培养技术 一.花药培养 花药培养是指改变花粉的发育程序，使其分裂形成细胞团，进而分化成胚状体，产生再生植株，或形成愈伤组织，由愈伤组织再分化成植株。 目前已有250多种植物花药培养成功。花药培养获得单倍体的技术途径已在禾本科作物、茄科作物、十字花科作物的育种中广泛应用。 花药培养的基本程序： 外植体选择——外植体(花蕾)预处理—— 外植体消毒——剥取花药——接种——诱导培养——分化培养——移栽 1.花药的材料选择 基因型、生理状态及小孢子发育时期等对花药和花粉培养效果具有极大的影响，因而是材料选择所要考虑的主要因素。 (1) 基因型 供体植株遗传背景对花药和花粉培养成败至关重要。在进行花药和花粉培养时，应选择那些容易培养成功的材料来做。 不同苹果品种的花药培养胚状体的诱导率 (2) 生理状态的选择 花药和花粉供体植株的生理状态，对花粉愈伤组织的诱导率也有直接的影响。不同季节接种的花药愈伤组织诱导率也有显著变化。如小麦早期接种的材料比晚期接种的材料愈伤组织诱导率可提高2—3倍。 (3) 花粉发育时期的选择 一般情况下，对大多数植物来说，在单核时期的花粉比较容易培养成功。确定花粉发育时期的方法可用涂片法来进行。 PMC→四分孢子→小孢子单核期→小孢子双核期→小孢子三核期（成熟花粉） 一般选择单核期　细胞核较大居中，称单核中央期。随着细胞体积迅速增大，细胞核由中央位置推向一边，即单核靠边期。以上均为单核期花粉。 单核期的确定　根据细胞观察推测，双核期的花粉中开始积累淀粉，不能使花粉发育成植株。通常采用醋酸洋红或碘化钾染色，再压片镜检，以确定花粉的发育时期。但是接种前不可能把所有的花粉都进行一次发育时期的镜检，通常是按照花蕾长度大小与花粉发育年龄的相关性，在实际操作中取一定大小的花蕾进行的。如马铃薯在花冠露出萼片一半时大多数花粉处于单核晚期。 烟草小孢子发育时期对胚状体诱导率的影响 一些植物花药和花粉培养适宜的小孢子发育时期 二.预处理 花药和花粉的预处理措施主要是低温处理。在很多情况下，低温处理可明显提高花药和花粉培养的效果。 一般耐寒植物比喜温植物可耐受较低的温度，处理的温度可低些。低温处理时间视使用的温度而定，较低的温度处理时间要短，较高的温度处理时间宜长。 低温处理的作用： 1.可以激发花粉母细胞产生两个相等核； 2.保持高比例的强生活力花粉，同时延缓体细胞 组织的衰老； 3.激发花粉产生原胚； 4.促进细胞同步分裂 鉴定花药和花粉植株染色体倍性的方法有：形态鉴定、结实性鉴定、染色体数目鉴定和遗传标记鉴定。 花药和花粉有自然加倍的可能，但是发生的频率很低，因此，一般需对鉴定出的花药和花