实验四、普通显微镜的使用及细菌的简单染色法.docVIP

实验四 普通显微镜的使用及细菌的简单染色法 一、实验目的 1.学习并掌握油镜的原理和实使用方法。 2.复习普通台式显微镜的结构、各部分的功能和使用方法。 二、实验原理 （一）.普通显微镜 普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜。它们由机械装置和光学系统两大部分组成。在显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，它直接影响着显微镜的分辨率。而在普通光学显微镜通常配置的几种物镜中，油镜的放大倍数最大。使用油镜时，需在载玻片与镜头之间加滴油，原因：1.增加照明亮度。2.增加显微镜的分辨率。 （二）.简单染色法 简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。它适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。 常用碱性染料进行简单染色，因为：在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带有负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更容易于识别。常用做染色的染料有：美蓝、结晶紫、碱性复红等。 三、实验器材 1.菌种 枯草芽孢杆菌12~18营养琼脂斜面培养物及其装片。 2.染色剂 吕氏美蓝染液、石炭酸复红染液。 3.仪器或其他用具 显微镜，酒精灯，接种环，擦镜纸，生理盐水等。 四、操作步骤 1.涂片 取两块载玻片，各滴一滴生理盐水于玻片中央，用接环以无菌操作从枯草芽孢杆菌斜面上挑取少许菌苔于水滴中，混匀并涂成薄膜。 2.干燥 室温自然干燥。 3.固定 涂面朝上，通过火焰2~3次。 此操作过程称热固定，其目的是使细胞质凝固，以固定细胞形态，并使之牢固附着在载玻片上。 4.染色 将玻片平放于玻片搁架上，滴加染液于涂片上。 5.水洗 倒去染液，用自来水冲洗，直至图片上流下的水无色为止。 6.干燥 自然干燥，或用电吹风吹干，也可用吸水纸吸干。 7.镜检 涂片干燥后镜检。 （1）在低倍镜下观察。 （2）在高倍镜下观察。 （3）在油镜下观察：在高倍镜或低倍镜下找到要观察的样品区域后，用粗调节器将镜筒升高，然后将油镜转到工作位置。在待观察的样品区域加香柏油，从侧面注视，用粗调节器将镜筒小心地降下，使油镜浸在镜油中并几乎与标本相接。将聚光器升至最高位置并开足光圈，若所用聚光器的数值孔径超过1.0，还应在聚光镜与载玻片之间也加滴香柏油，保证器达到最大的效能，调节照明使视野的亮度合适，用粗调节器将镜筒徐徐上升，直至视野中出现物像并用细调节器使器清晰准焦为止。 五、实验报告 1.结果 根据观察结果，绘出两种细菌的形态图。 2.思考题 （1）.实验的注意事项有哪些？ （2）为什么要制片完全干燥后才能用油镜观察？ （3）如果涂片未经固定，将会出现什么问题？如果温度过高、时间太长，又会怎样呢？