试验蚕豆根尖的微核检测.pptVIP

（一）、原理 （二）、器材和药品 （三）、方法与步骤 （三）、方法与步骤 （三）、方法与步骤 （四）、 注意事项 （五）、 实验报告及思考题 * * 实验六 蚕豆（Vicia faba）根尖 微核检测 微核是染色单体或染色体的无着丝点断片或因纺锤体受伤而失去的整个染色体，在分裂后期，仍留在细胞质中，或因核膜受损后核物质向外突出延伸形成，形成一个或几个规则的圆形或椭圆形小体，其嗜染性与细胞核相似，比主核小（一般为主核的1/3以下），故称微核。 1. 材料准备 松慈青皮豆。 2. 仪器 显微镜、温箱、恒温水浴锅、冰箱、手撳计数器、解剖盘（或用铝制饭盒）、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、试剂瓶、烧杯等显微压片试剂用具。 3. 药剂 （1） 5 mol/L HCl （2） 卡诺氏液 （3） 席夫氏（Schiff）试剂 （4）SO2洗涤液 1. 蚕豆浸种催芽； 2. 被监测液处理根尖； 3. 根尖细胞恢复培养 ； 4.固定根尖细胞： （1）将恢复后的种子，从根尖顶端切下1厘米长的幼根放入青霉素空瓶中，加卡诺氏固定液固定24小时。 （2）固定后的幼根如不及时制片，可换入70%的乙醇中，置4℃的冰箱内保存备用。 5.孚尔根（Feulgen）染色： （1）固定好的幼根，在青霉素瓶中蒸馏水浸洗2次，每次5分钟。 （2）吸净蒸馏水，再加入5 mol/L HCl将幼根泡住，连瓶放入28℃水浴锅中水解幼根25分钟左右（视根软化的程度可适当增减时间）。至幼根被软化即可。 （3）用蒸馏水浸洗幼根2次，每次5分钟。 （4）在暗室或遮光的条件下加席夫（SCHIFF）试剂，每瓶用量以淹住幼根液面高出2毫米为好。 （5）除去染液，用SO2洗涤液浸洗幼根2次，每次5分钟。 （6）用蒸馏水浸洗一次，5分钟。 （7）将幼根放入新换的蒸馏水中，置4℃的冰箱内保存，可供随时制片之用。 6.制片： （1）将幼根放在擦净的载玻片上，用解剖针截下1毫米左右的根尖。 （2）滴上少许45%的醋酸溶液，用解剖针截下1毫米左右的根尖。 （3）加盖一清洁的盖玻片，注意不要有气泡。 （4）再在盖玻片上加以小块滤纸，轻轻敲打压片。 7.镜检及微核识别标准： 将制片先置显微镜低倍镜下，找到分生组织区细胞分散均匀、膨大、分裂相对较多的部位，再转到高倍镜（物镜40×）下进行观察。 1. 对严重污染的水环境，监测处理时造成根尖死亡，应稀释后再作测试。 2. 在没有空调恒温设备的条件下，如室温超过35℃,MCN本底可能有升高现象，但可经污染指数法数据处理，不会影响监测结果。 1、微核实验污染划分有哪些？ 2、提交表9-1并进行污染划分和分析。 * *