桑蚕对马尾松毛虫质型多角体病毒敏感性及病毒基因组中若干片段分析.pdfVIP

中文摘要 本论文包括两章内容。第一章为桑蚕对马尾松毛虫质型多角体病毒的敏 感性研究。用虫体克隆技术，对马尾松毛虫质型多角体病毒湖南株进行了分 离纯化，鉴定其为1型质多角体病毒。以家蚕春蕾×镇珠杂种FJ、F2代二龄 起蚕进行毒力试验，同时用家蚕l型质多角体病毒为对照。结果表明：马尾 松毛虫质型多角体病毒湖南株能引起蚕儿发病，但毒力小于家蚕质型多角体 病毒且差异显著；马尾松毛虫质型多角体病毒湖南株感染家蚕试验种F，和Fz CPB(质多角体)，前 代幼虫28天后的半致死剂量(LD5。)分别为885和18 者为后者的49倍，说明F2代家蚕幼虫较F1代对该病毒更为敏感。马尾松毛 虫质型多角体病毒湖南株感染后的家蚕，其结茧率、化蛹率、羽化率、全茧 量、茧层量和单蛾产卵数均有所下降；F2代、F1代羽化率与病毒感染剂量成 负相关，且分别达显著和极显著水平；全茧量、茧层量、茧层率、单蛾产卵 数与病毒感染剂量无显著关联。 第二章研究内容为马尾松毛虫质型多角体病毒基因组中S6，S7和S10 Q 段经RT．PCR反应得到目的cDNA,与克隆载体连接后，转化大肠杆菌DH5 感受态细胞，阳性克隆经酶切、电泳鉴定后测序。研究结果表明：基因组第 lO片段(S10)cDNA含有944个核苷酸，编码分子量为28．5kD，由248个氨 基酸组成的多角体蛋白：在正链的第1．5核苷酸与第680．684核苷酸处含有 反向重复序列，即5’．AGTAA．3’和5’．TTACT．3’，提示其5’末端序列与 S10 S10与BmCPV一1 内部序列可以形成较为复杂的二级结构。DpCPV-HN 相比较，核苷酸序列同源性为91．2％，多角体蛋白氨基酸序列同源性为98．O％。 DpCPV两个毒株(江西株与湖南株)多角体蛋白基因的开放阅读框序列共有 6个核苷酸位点发生替换，仅导致多角体蛋白氨基酸序列1个位点发生替换 cDNA 即江西株Lys209一湖南株Ar9209，它们分别由AAA和AGA编码。S7 kD，由448个氨基酸组成的多肽p50， 含有1501个核苷酸，编码分子量为49．8 hominis的DnaK样蛋白具 氨基酸序列中含一个核定位信号，与Mycoplasma O％， S7的核苷酸序列同源性为87 S7与BmCPV．1 有序列相似性。DpCPV．HN ORF由1686个核苷酸组成，编码分 编码的氨基酸序列同源性为92．8％。S6 子量为63．7 l(D，含有561个氨基酸的多肽p64，氨基酸组成中有较高的亮氨酸 0％)，氨基酸序列中各含一个亮氨酸拉链结构和ATP／GTP结合位点，具 含量(10 有两个核定位信号，预示其可能具有与核酸结合的活性，在病毒复制中起重 S6与BmCPV一1 要作用。p64与RRSVPns7蛋白具有序列相似性。DpCPV．HN 5％。 S6相比，核苷酸序列同源性为83．7％，编码的氨基酸序列同源性为92 对编码p50C259的eDNA序列进行克隆，构建成融合基因表达载体 量约为37．3kDa的融合