模拟失重对大鼠骨折愈合的实验分析.pdfVIP

中 文 摘要 箭{支，二一一 ＼～一一一+ 模拟失重条件下细胞的生长与分裂受到影响，细胞问的接触 减弱，骨髓脱矿物盐，造成骨质疏松或骨萎缩，不利于骨折愈合及 创伤组织的再生。／骨短距蛋白是机体自身骨组织产生的一种具有 局部调节作用的活性物质，在骨骼的构建与重塑中起到了非常重 要的作用，如骨形成蛋白(BMP)、骨钙素(OC)、骨桥素(OPN)等。 对骨短距蛋白进行深入研究，有助于揭示骨代谢异常机理。已有 研究证明，在失重条件下，某些蛋白的活性及形成会受到影响，进 而导致在骨骼结构功能方面产生变化。目前研究较多的是OC，许 多文献报道在失重条件下骨和血清OC含量显著降低；但对BMP 的研究却不多。此外，目前国内外研究资料表明，大鼠头低尾部悬 吊的动物模型是比较理想的模拟失重动物模型，已在医学界广泛 加以采用。改本研究主要应用组织化学、分子生物学的技术，观察 后肢骨折的大鼠在模拟失重情况下的愈合过程、组织形态和细胞 因子的变化及其特点。阐明模拟失重影响骨折的机理，为今后航 空航天医学的发展应用提供一定的参考意义。 材料与方法 ＼ 本研究将64只大鼠随机分为八组：失重1组(A)：骨折形成 后立即对动物头低位尾悬吊7天取材；失重2组(B)：骨折形成后 立即对动物头低位尾悬吊14天取材；失重3组(C)：骨折形成后 立即对动物头低位尾悬吊2l天取材；失重4组(D)：骨折形成后 立即对动物头低位尾悬吊28天取材；对照l组(E)：骨折形成后 动物自由活动7天取材；对照2组(F)：骨折形成后动物自由活动 ．1． 14天取材；对照3组(G)：骨折形成后动物自由活动2l天取材；对 照4组(H)：骨折形成后动物自由活动28天取材。各组研究对象 年龄、体重、性别、营养状态匹配。 首先建立大鼠骨折模型：麻醉方法采用氯胺酮ketamine和 846液，注射途径采用腹腔内注射。手术方法是随机选择大鼠的 单侧后肢(左或右)，将大鼠单侧腓骨中段用剪刀剪断，再缝合伤 口，完成骨折模型的建立。然后建立骨折大鼠失重模型：在麻醉状 态下，将大鼠尾部使用氧化锌胶布固定在鼠笼顶壁，上肢可活动并 触及笼底。鼠与鼠之间及鼠与笼壁间保持足够的距离以免影响头 低尾悬吊模型的建立。常规喂养并定期检查及清理。最后使用颈 部折断法处死大鼠，按病理科要求取得腓骨标本并固定。使用二 步法免疫组化检测BMP。同时行透射电镜观察标本。 实验结果 一、免疫组化的定量标准：随机选取10个高倍镜视野，平均阳 性细胞10个，定为阴性(一)；平均阳性细胞10～50，为阳性 (+)；平均阳性细胞50个，为强阳性(++一卅)。 1．A组与E组相比，X2=1．640(P0．05)，无显著性差异。 异。 差异。 差异。 二、光镜、电镜病理结果： 实验组与对照组相比，骨折早期及晚期的愈合明显延迟。 ·2· 讨 论 失重是身体任何部分或者系统之间没有压力差，它引起骨一 肌肉形态重力负荷的消失。失重对骨骼的影响是：l，骨膜生成受 抑制，在胫骨干骺端较明显。2．出现生长停止线。3．干骺区成骨 细胞数目减少。骨的变化主要是由于代谢和功能负荷水平的改变 引起。BMP是一种与骨细胞分化有关的酸性蛋白，分子量 BMP能够诱导血管周围问充质细胞分化为软骨细胞和骨细胞，从 而诱导骨形成。BMP可由成骨细胞产生并主要与骨基质结合，很 少释放到骨外。BMP的主要生物学作用是诱导未分化的间质细 胞分化形成软骨和新生骨，还能增加AKP活性和胶原合成。 在飞行大鼠骨折愈合的影响研究中发现骨折愈合被抑制，骨 痂形成甚少，碎骨片不能被充分固定，类骨质相对容量上升，以及 与其共存的成骨细胞数量和功能下降，导致失重状态下新形成骨 的矿物质紊乱。对已骨折的腓骨和未骨折的胫骨的分析显示，真 空失重状态下或尾部悬吊状态下14天可产生相似的变化。后肢 悬吊亦称头低位悬吊或尾悬吊，是一种消除后肢负荷以模拟空间 微重力环境的方法