水产动物主要病原细菌免疫特性的比较分析.pdfVIP

水产动物主要靖成细—r鬼疰掌特性的比较研究 水产动物主要病原细菌免疫特性的比较研究 摘要 本文对水产养殖动物6种主要病原菌，哈维氏孤菌(Hbrioharveyi)、溶藻胶 tarda)和荧光假单胞菌(Pseudomonas 迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella fluorescens)的 全菌蛋白及外膜蛋白的结构和免疫特性作了比较分析。发现同属与非同属细菌之 间，这些蛋白的结构差异有一定的规律可循，而这些规律将有助于我们对细菌鉴 定的研究和对高效疫苗的开发。 本研究利用免疫试管凝集法，聚丙烯酰胺凝胶电泳法，免疫印迹法，荧光抗 体法，酶联免疫吸附法等对6种病原性细菌的全菌蛋白进行了结构和免疫特性的 分析。其结构主要通过聚丙烯酰胺凝胶电泳法电泳图谱形式表现；而各个细菌的 免疫特性则由细菌与其抗体之间的交叉反应来实现。通过上述5种方法对其交叉 性的测定发现，同属之间的抗原抗体的交叉反应较大。并且通过Westem-blot还 可以看出同属细菌之间交叉反应的蛋白带，多数具有相同的分子量。实验证明： 抗哈维氏弧菌的抗体，与哈维氏弧菌，溶藻胶弧菌和副溶血弧菌有明显的交叉反 应，分子量相同的交叉反应蛋白带为：135．6kDa，121．5kDa，而此抗体与迟钝爱 德华氏菌和荧光假单胞菌在此蛋白处没有交叉反应。抗溶藻胶弧菌的抗体，与哈 维氏弧菌，溶藻胶弧菌和副溶血弧菌有明显的交叉反应，分子量相同的交叉反应 kDa，34．9 蛋白带为：96．5kDa，48．4kDa，39．2kDa，而此抗体与迟钝爱德华氏 菌和荧光假单胞菌在此蛋白处没有交叉反应。抗副溶血弧菌，与哈维氏弧菌，鳗 弧菌和副溶血弧菌，分子量交叉反应的蛋白带为：55．1kDa，而此抗体与迟钝爱 德华氏菌和荧光假单胞菌在此蛋白处没有交叉反应。弧菌问出现的免疫交叉反应 的蛋白带可能是弧菌对于抗弧菌抗体所具有的特异性的蛋白。可以作为诊断弧菌 病的依据之一。 本研究还以迟钝爱德华菌为材料分析比较了PMSF、TritonX-100、SDS及 Sarkosyl四种细菌外膜蛋白分离制备方法对水产病原细菌的主要外膜蛋白 (MOMP)组成结构的影响。结果表明PMSF与Triton X-100方法制各的迟钝爱德 kDa 华氏外膜蛋白，SDS—PAGE电泳显示多条蛋白带，其主要外膜蛋白分子量为114 和50 水产动物生要蒲魇知苗免废掌特缝的比较研咒 64 kDa、50kDa和37 逊显示抗血清与迟钝爱德华氏菌菌株的外膜蛋白有2条免疫反应带，其大致分子 量为I 外膜蛋白是较为有效的。 为探寻水产病原弧菌问的共同抗原决定簇以及弧菌本身的特异性抗原决定 簇，为水产动物细菌性病原的早期快速诊断以及弧菌亚单位疫苗和DNA疫苗提供 基础材料。本研究对溶藻胶弧菌和鳗弧菌全菌、破碎菌及外膜蛋白的免疫特性作 了初步的分析。结果证明了它们结构之间存在着差异：溶藻胶弧菌的外膜蛋白主 发色带主要有一条，分子量为：49kDa。溶藻胶弧菌的发色带主要有两条，分子 量分别为：26kDa，43kDa。在外膜上，通过这种方法没有找到这两种弧菌之间 没有共的抗原决定簇。可能这两种细菌之间在外膜蛋白上没有相同的抗原决定 簇，本研究将会对更多种弧菌的外膜蛋白进行比较，以期找出几种弧菌所共同具 有的抗原决定簇。 关键词：细菌，外膜蛋白，疫苗，鉴定，诊断 查!竺竺圭苎竺墨竺!兰墨竺!竺竺兰竺!墨 —●________———●——_—●——●————————●————-—————_—————●————-———_——————一 一 of the