马铃薯叶片原生质体的培养.pdfVIP

2o08．3 作物杂志 Crops 马铃薯叶片原生质体的培养术 邸宏 刘昭军 卢翠华 摘 要 以马铃薯四倍体普通栽培种品系俄8 薯四倍体普通栽培种品系俄8和花药培养诱导的双 和双单倍体品系讷16-3和讷16—14脱毒试管苗叶片 单倍体品系讷16-3和讷16—14脱毒试管苗叶片为材 为材料，通过对预处理、酶解时间及培养基激素配比 料，对原生质体培养的关键影响因素进行了分析探 等因素的研究，优化了原生质体游离纯化和培养体 讨，以期建立相对稳定高效的马铃薯叶片原生质体 系。试验结果表明：低温预处理有助于提高原生质 培养体系，为体细胞融合奠定基础。 体的产量和质量，最适酶解时间分别为12．5h(四倍 1 材料与方法 体栽培种)和12h(双单倍体)，MS-4-NAA 1．0mg／L+ 6一BA 0．5mg／L为最佳愈伤增殖培养基，MS-4-ZT 1．1 试验材料的准备 2．5mg／L-4-IAA 0．5mg／L为最佳愈伤分化培养基。 用带1个腋芽的马铃薯茎切段材料进行脱毒试 关键词 马铃薯；原生质体；培养 管苗的扩大繁殖，培养基为MS基本培养基附加3g／ L活性碳。植株在温度(25 4-1)℃，光照强度为 马铃薯(Solanum tuberousm L)是同源四倍体 2 000～3 0001x，16h光照、8h黑暗条件下培养3周。 无性繁殖作物，细胞杂合水平高，基因分离复杂，在 1．2 无菌苗的低温预处理 四倍体水平上选育优良基因型品种的效率很低。我 在原生质体游离前2d，即试管苗生长19d后， 国是16世纪下半叶从欧洲引入的马铃薯栽培种，育 将其转到4℃的冰箱中培养48h。将同一时间接种 成的马铃薯品种都是用栽培品种做亲本，遗传背景 的试管苗在(25±1)℃条件下培养作对照。 非常狭窄。马铃薯的基因资源约有74％存在于二 1．3 原生质体的分离纯化 倍体野生种和近缘栽培种中，由于四倍体与二倍体 取试管苗不同部位叶片约1．Og，置于10mL酶 之间杂交不亲合或杂交后代产生不育的三倍体，很 液中，26qC条件下黑暗酶解。酶解液组成包括 难产生后代，因此，在很大程度上限制了通过常规育 1．0％纤维素酶(Cellulase R一10)和0．5％离析酶 种方法引进丰富野生种质的可能性。随着细胞工程 (Macerozyme R．10)，2％ 聚乙烯吡咯烷酮(PVP)， 技术的不断成熟和完善，以原生质体操作为基础的 3mmoL／L无水吗啉乙磺酸(MES)，0．01％水解酪蛋 细胞杂交成为马铃薯育种的新途径。利用马铃薯花 白(CH)，用CPW溶液溶解，甘露醇为渗透压调节 药培养产生的双单倍体可直接与野生种二倍体进行 剂，浓度为0．40mol／L，pH值调至5．6。 体细胞融合，将丰富的野生资源库中的抗病虫性、高 酶解结束后，利用400目不锈钢网筛过滤，滤掉 于物质、低还原糖等基因转移到栽培种中，从而丰富 大的组织块。将原生质体用洗液I(CPW溶液+ 遗传基础，扩大遗传背景。 0．45moL／L甘露醇)悬浮液离心5min(500r／min)，弃 自1977年马铃薯原生质体培养成功以来 J，多 去上清液，用洗液Ⅱ(CPW溶液+23％蔗糖)重悬， 个品种(品系)的马铃薯原生质体培养再生出了植 缓慢在液面加入2mL洗液 I，离心 10rain(600r／ 株。但我国在这一领域的研究还