用大孔吸附树脂分离纯化育亨宾.pdfVIP

第31卷第2期 湘潭师范学院学报(自然科学版) Vo1．31NO．2 2009年6月 JournalofXiangtanNormalUniversity(NaturalScienceEdition) June．2009 用大孔吸附树脂分离纯化育亨宾 刘 璇，曹福祥，赵 莹，龙绛雪，董旭杰 (中南林业科技大学 生命科学与技术学院，湖南长沙410004) 摘 要：以育亨宾(Yohimbine)的吸附率和解吸率为指标筛选大孔吸附树脂，研究其吸附和解吸条件，并考察所选定树 脂的吸附和解吸性能。结果表明，将云南萝芙木根粉浸提液蒸去乙醇，并用2moW1HCI调pH=3后进行吸附，所选用的H 一 20型大孔吸附树脂对育亨宾的吸附率可达到98％。然后用98％甲醇(pH=1)进行解吸，解吸率达85％。通过H一20型 树脂的吸附和解吸，育亨宾的纯度可提高近20倍。 关键词：育亨宾；大孔吸附树脂；吸附；解吸 中图分类号：0647．3 文献标识码：A 文章编号：1671—0231(2009)02—0044—04 育亨宾是一种有效的or．一肾上腺素受体拮抗剂和性兴奋剂…，具有较广泛的药理作用，其中药理作用 最为明显的是用于治疗男性性功能障碍，亦用于临床上治疗动脉硬化、风湿病等疾病 ，育亨宾片剂已通 过美国FDA审核在国际市场上流通 J。云南萝芙木 (RauvofliayunnacnsisTsiang)属荚竹桃科植物 ，其 根主要成分有育亨宾、利血平等多种生物碱 】，育亨宾含量为0．056％[71。近几年来，国内研究主要以 利血平的提取、分离报道为主 。。，而对育亨宾的提取、分离方面的研究报道很少 ¨。本研究是用70％ 的乙醇从云南萝芙木中提取育亨宾、利血平等多种生物碱，然后用大孔吸附树脂进行吸附和解吸来分离、 纯化育亨宾。 1 实 验 1．1 仪器、材料与试剂 IC一2010AHT高效液相色谱仪：日本岛津公司；20mill×400mn／玻璃层析柱；育亨宾：Sigma公司；乙 腈：色谱纯，天津市大茂化学试剂；其他试剂：分析纯，天津市大茂化学试剂；大孔吸附树脂AB一8、H一20、 x一5、HZ一818、D—lOl、D一151、DM一130、Rs一301：上海瑞丰树脂科技有限公司；云南萝芙木根粉40目 (含水量5 ；磷酸缓冲液：10mol／l，pH=5．1。 1。2 高效液相色谱分析方法 1．2．1 色谱条件 色谱柱：ODS—C18(4．6mln×250mm，5ixm)；流动相：乙腈：磷酸缓冲液 (V／V)=20：80；流速：1．0 mL／min；检测波长：268Bin；柱温：30℃。 1．2．2 育亨宾标准曲线的制备 精密称取育亨宾9．4mg，用 1ml甲醇溶解后定容至 10rnl摇匀，作为育亨宾标准品溶液。分别量取 育亨宾标准品溶液，用甲醇稀释配制成9．4 ml、11．75g／m1、14．1 g／ml、16．45 g／ml、18．8 g／IIll的 溶液。于上述色谱条件各进样20 ，记录与其对应的峰面积，将样品浓度 (x)与经高效液相色谱测定的 峰面积(Y)进行线性回归，，，=455．6 +177．03，R =0．991。结果表明，育亨宾在9．4~g／ml～l8．8 ml 范围内具有 良好的线性关系。 1．2．3 样品测定 取按I．3实验方法制得的样品溶液以10000r／min离心10min，取上清液20 l用高效液相色谱测 定，通过回归方程计算样品溶液中育亨宾的浓度。 收稿 日期：2009—02—25 基金项 目：云南萝芙木良种培育和规范种植关键技术开发项 目(云发改高) 作者简介：刘 璇(1983一)，女，湖南郴州人，硕士生，研究方向：生物化学。 1．3 实验方法 1．3．1 吸附原液的制备 取干燥的云南萝芙木根粉(40目)400g，用50ml水润湿，加入4000ml70％的乙醇，用 HC1调pH= 2，震荡提取3h。过滤保留滤液，残渣用以上溶剂再提取1次，合并两次滤液，减压蒸馏至2000ml，得到 吸附原液。 1．3．2 大孔树脂预处理 将AB一8、H一20、x一5、HZ一818、D一101、D一151、DM一130、Rs一301等8种树脂分别用无水乙醇充 分溶胀浸泡 10h。用蒸馏水冲洗，直至无明显乙醇味