灰飞虱体内水稻条纹叶枯病毒的快速检测及Wolbachia KefKL功能分析.pdfVIP

KefKL功能研究 变3i!堡内水稻条纹叶枯病毒的快速检测及Wolbachia 摘要 水稻条纹叶枯病毒(ricevirus，RSV)是单链负义编码的RNA病毒， stripe 它能引发水稻条纹叶枯病，导致水稻产量严重下降。这种病毒主要经灰飞虱 striatellus (LaodelphaxFallen)传播，可以在灰飞虱体内复制并经卵传给下一代。 所以，灰飞虱体内水稻条纹叶枯病毒的快速而准确的检测对水稻条纹叶枯病的预 测和防治都具有重要的意义。在这里，我们采用RT-PCR的方法对单个传毒灰飞 虱体内的水稻条纹叶枯病毒进行了检测。用位于水稻条纹叶枯病毒的依赖于 RNA RNA的RNA聚合酶(RNAdependent polymerase)基因上的一对引物，我们 从带毒灰飞虱和染病水稻叶上都特异性地得到了445bp的PCR产物。同时，在 灰飞虱actm基因内含予和外显子相连处设计了一对引物，其PCR产物做为RNA 特异的阳性对照，从而保证RT-PCR结果的准确性。我们还优化了双重RT-PCR 的条件，即一次PCR反应得以同时检测水稻条纹叶枯病毒和灰飞虱actin基因的 存在。我们的实验结果表明RT-PCR方法可以快速而准确地检测出灰飞虱带毒与 否，从而得以对水稻条纹叶枯病的爆发进行早期监测。 Wolbachia是一种经母系细胞质遗传的胞内共生菌，属于立克次氏体 (Rickettiabacteria)a-原细菌，是迄今为止已知的最广泛存在的胞内共生菌之一。 Wolbachia谷胱甘肽调控的钾离子外流通道蛋白KefKL存在两个重要的结域： 蛋白KefB的蛋白序列有35％的～致性，尤其是功能关键的L75S区域和 HELETAID 流通道蛋白KetKL有与KetB类似的功能，可以抑制亲电子试剂丙酮醛 KefKL功能研究 灰飞虱体内水稻条纹叶枯病毒的快速检测及Wolbachia 丙酮醛是细胞在糖代谢过程中产生的有毒物质，对共生菌Wolbachia有毒害作用。 si廊ulans 响。但是我们发现，基因组中含有诧倒基因的Wolbachia，如Drosophila Cantons(DM)体内的 melanogaster Riverside(DSR)体内的mRi，Drosophila melanogaster 郴eICS和Drosophila s血吖J鲫sNoumea(R3A)体内的辟No，Drosophila simulansWatonsville／Drosophila Drosophila 枷a，在该丙酮醛浓度下则会死亡。在宿主细胞质内生存的Wolbachia必然要面 临宿主细胞代谢产生的丙酮醛的威胁，我们的实验证明Wolbachia谷胱甘肽调控 理环境，从而得以广泛传播。 本研究的创新点：1．创建了在RNA水平上，高效特异快速检测灰飞虱体内水稻 条纹叶枯病毒的R『I’．PCR方法2．初步认识了胞内共生菌阡白f6口c^缸谷胱甘肽调控 的钾离子外流通道蛋白KeIKL的功能。 酮醛 灰飞虱体内水稻条纹叶枯病毒的快速检测及WolbachiaKefKL功能研究 Abstract Rice the oftherice diseasewhich virus限SV)is stripe pathogen stripe