皱纹盘鲍胚胎，幼虫超低温保存技术分析.pdfVIP

皱纹盘鲍胚胎，幼虫超低温保存技术研究 皱纹盘鲍胚胎，幼虫超低温保存技术研究 摘要 筛选出两种混合型抗冻剂配方：5#，过滤灭菌海水中添加14％的二甲亚砜、 6％的葡萄糖、4％的l，2一丙二醇保存2～4细胞期的胚胎；7#，过滤灭菌海水 中添加8％的二甲亚砜、4％的葡萄糖、2％的l，2一丙二醇保存担轮幼虫；抗冻剂 进入液氮罐中逐级降温，距离液氮表面25cm、15cm、5era各停留5分钟，保存一 冻，解冻后逐步去除抗冻剂，胚胎和幼虫的成活率基本上可以稳定在35％和25％ 左右。 冰箱中预冷好的玻璃化液中，冷冻体积为O．2hal，在--20℃中短暂平衡5分钟。进 中保存，距离液氮面5era、15cm、25era，每级停留6分钟，进入35℃水浴解冻， 解冻后的胚胎用解冻液冲洗3～5次，然后放入新鲜海水中培养。其中9辑玻璃化 液解冻后成活率达13％，变态率达8％，其余四组玻璃化液解冻后胚胎成活率达8 ％左右，变态率4N左右。其次，孵化前的担轮幼虫经冷冻保存的存活率也较好， 用9#、10#、16#玻璃化液保存，解冻后分别获得了3～6％的成活率，而用l #、3#玻璃化液保存，则仅见l～2个幼体微弱旋转。换新鲜海水培养后，幼体死 亡。其余各时期采用各种玻璃化液保存，均未觅成活个体。 关键词 皱纹盘鲍 胚胎 幼虫 超低温保存 抗冻剂 玻璃化液 皱纹盘鲍胚胎，幼虫超低温保存技术研究 AND STUDIES0NCRYOPRESERVATION0FEMBRYoSLARVAE FRoMTHEHALloTISDISCUSHANNAIINo Abstract Themethodof of andIarvaefromHaliotisdiscushannai cryopreservationembryos to Ino，using eryoprotectant SUCCCSSfollycryopreservedembryos，andusing to monotrochal propane-di01)ascryoprotectantsuccessfuIlycryopreserved wasmixedwiththe three in0．6mI larva．cryoprotectant sampleby steps centrifigue tube．thevolumeof iS0．4m1．Theresultsof and tests cryopreservation freezingthawing showedthatthesurvivaIrateofthe andJarvaewouldbeas as35％and embryos high the weremaintainedat—20℃for 25％。whensamples lOmin，thcn—80℃for5min，then maintainedat25cm、15cm、5cmabove 5rain．The liquidnitrogen卜196℃)forthawing testshowedthatthe survivalrateof