碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）诱导骨肉瘤U2-os细胞凋亡机制的分析.pdfVIP

中文摘要 目一的， ，细胞在生长、分化过程中不断的接受外界刺激，其中生长因子 对细胞的生长、分化具有重要作用，生长因子与肿瘤的发生过程也 有密切的关系。成纤维细胞生长因子(FGF)能够诱导中胚层和神 经外胚层来源细胞的增殖和分化，许多组织和细胞都可以分泌 FGF，FGF可以促进多种细胞的生长和分化。生长因子可以作为 促分裂剂作用于多种细胞，剥夺生长因子可以导致细胞生长停止 或细胞死亡，因此通常认为生长因子与促进细胞的增殖和存活有 关。但许多证据显示，某些生长因子也能够诱发细胞凋亡，如表皮 亡。碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)也能诱导某些细胞发生凋 亡，如MCF一7、Ewings伪瘤等，因此”生长因子”的称谓已经失去 了其传统意义，生长因子在细胞的生长调控方面具有双重作用。 细胞的各种生命活动都是受到精细调控的．参与细胞分化、发 育和死亡等重要过程的细胞凋亡也不例外，目前已发现多条信号 转导途径参与凋亡的诱导与抑制。丝裂原活化蛋白激酶(MAPK) 是一群特殊的丝／苏氨酸蛋白激酶，它通过其上游MAPKK使其保 守的苏氨酸和酪氨酸残基双磷酸化而活化，活化的MAPK可转移 到核内，参与基因表达调控。现已发现MAPK家族主要有三条平 行的信号转导通路：ERKl／2、JNK和p38，三条通路可以活化不同 的转录因子，启动不同的基因表达，从而引发不同的细胞反应。现 在认为ERKl／2主要介导生长促进信号，而后两条途径主要介导 生长抑制信号。y 2一OS 本课题欲遛过研究ERKl／2、JNK、p38在bFGF诱导u 细胞凋亡中的作用来探讨酪氨酸蛋白激酶途径参与细胞凋亡调控 的作用机制。 实验方法 2一 1．采用台盼蓝排除检测法和MTT比色法检测bFGF对U OS细胞生长的抑制情况。 2一 2．采用固定后细胞PI染色流式细胞术检测bFGF诱导u OS细胞死亡的形式。 3．采用抗磷酸化ERKl／2、JNK、p38活性抗体，利用SDS— PAGE和Westernblot测定bFGF诱导U2一OS细胞凋亡过程中 ERKl／2、JNK、p38活性的变化情况。 j f实验结果 ～～、 2一OS细胞生长情况的影响： 1．不同浓度bFGF对u 2一OS细胞 随着bFGF作用浓度的增加，台盼兰排除法显示u 2一OS细胞活力逐渐降 死亡百分比逐渐增加，MTF比色法显示u 低。 2一os细胞生长情况的影响： 2．bFGF处理不同时间对U 2一OS细胞 随着bFGF作用时间的延长，台盼兰排除法显示U 2一OS细胞活力逐渐降 死亡百分比逐渐增加，MTr比色法显示u 低。在流式细胞术DNA含量曲线上显示出明显的亚二倍体峰 2一OS细胞凋 (凋亡细胞峰)，并且随着bFGF作用时间的延长，U 亡百分比逐渐增加。 3．bFGF不同处理时间对ERK、JNK、p38活性的影响： 随着bFGF作用时间的延长，ERK活性逐渐降低，JNK活性迅 速升高，并维持在较高水平，p38活性轻微升高。、／