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专题九 生物技术实践 【构建知识网络】 【备考要点突破】 1．微生物的营养物质比较 营养物质 定义 作用 主要来源 碳源 凡能提供所需碳元素的物质 构成生物体的细胞物质和一些代谢产物，有些是异养生物的能源物质 无机化合物：CO2、NaHCO3；有机化合物：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等 氮源 凡能提供所需氮元素的物质 合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物 无机化合物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐；有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等 水 在生物体内含量很高，在低等生物内含量更高 不仅是优良的溶剂而且可维持生物大分子结构的稳定 无机盐 为微生物提供除碳、氮以外的各种重要元素，包括大量元素 细胞内的组成成分，生理调节物质，某些化能自养菌的能源，酶的激活剂 2．微生物的实验室培养 (1)培养基分类和应用 划分标准 培养基种类 特 点 用 途 物理 性质 液体培养基 不加凝固剂 工业生产 半固体培养基 加凝固剂，如琼脂 观察微生物的运动、分类、鉴定 固体培养基 微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种 化学 成分 天然培养基 含化学成分不明确的天然物质 工业生产 合成培养基 培养基成分明确 (用化学成分已知的化学物质配成) 分类、鉴定 用途 选择培养基 培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长 培养、分离出特定微生物(如培养酵母菌和霉菌时，可在培养基中加入青霉素；培养金黄色葡萄球菌时，可在培养基中加入高浓度的食盐) 鉴别培养基 根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品 鉴别不同种类的微生物，如可用伊红—美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌(若有，菌落呈深紫色，并带有金属光泽) (2)无菌技术 ①消毒和灭菌的区别 项目 消 毒 灭 菌 条件 使用较为温和的理化方法 使用强烈的理化因素 结果 杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子) 杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 适用 实验操作的空间、操作者的衣服和手 微生物的培养器皿、接种用具和培养基等 常用 方法 煮沸消毒法(如在100 ℃，煮沸5～6 min)、巴氏消毒法(如在80 ℃，煮15 min)；使用酒精、氯气、石炭酸等化学药剂进行消毒 灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌 ②三种常用灭菌方法的比较 灭菌方法 适用材料或用具 灭菌条件 灭菌时间 灼烧灭菌 接种环、接种针或其他金属工具 酒精灯火焰的充分燃烧层 直至烧红 干热灭菌 玻璃器皿(吸管、培养皿) 和金属用具等 干热灭菌箱内，160～170 ℃ 1～2 h 高压蒸汽灭菌 培养基等 100 kPa，121 ℃ 15～30 min (3)微生物的纯化培养：微生物的纯化培养常用的两种接种方法的比较 方法 平板划线法 稀释涂布平板法 注意 事项 ①接种环的灼烧 a．第一次划线前：杀死残留微生物，避免污染菌种和培养基b．每次划线前：杀死残留菌种，保证每次划线菌种来自上次划线末端c．划线结束后：杀死残留菌种，避免污染环境和感染操作者 ②灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种 ③划线时最后一区域不要与第一区域相连 ④划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破 ①稀释操作时：每支试管及其中的9 mL水、移液管等均需灭菌；操作时，试管口和移液管应在离火焰1 cm～2 cm处 ②涂布平板时： a．涂布器用70%酒精消毒，取出时，让多余酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃b．不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精c．酒精灯与培养皿距离要合适，移液管管头不要接触任何物体 目的 获得单细胞菌落：在培养基上形成的由单个菌种繁殖而来的子细胞群体 培养 平板冷凝后倒置培养，使培养基表面的水分更好地挥发，防止皿盖上水珠落入培养基造成污染 3．微生物的分离和计数 （1）筛选菌株：利用选择培养基筛选菌株。 （2）测定微生物数量的常用方法：统计菌落数目和显微镜直接计数。 （3）过程：土壤取样→样品的稀释→微生物的培养与观察。 【应用突破1】 (1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以________为唯一碳源的固体培养基上。从功能上讲，该培养基属于________培养基。 (2)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即________和________。 (3)为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力________。 (4)通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、________和________。无菌技术要求实验操作应在酒精灯________附近进行，以避免周围环境中微生物