《现代生命科学研究技术》实验指导-EMSA验证蛋白及DNA的结合-笔记版.pdfVIP

1  现代生命科学研究技术实验指导   利用凝胶阻滞实验（EMSA）验证蛋白与 DNA 的结合 一、实验原理及应用 凝胶阻滞实验（Electrophoretic mobility shift assay，EMSA），是一种研究蛋 白和核酸相互作用的技术。蛋白质与放射性标记或生物素标记的探针结合后， 形成的复合物在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移率比自由探针的迁移率大 大降低，表现为条带滞后。 凝胶阻滞实验具有简单、快捷、灵敏等优点，可用于检测 DNA 结合蛋白、 RNA 结合蛋白，并可通过加入特异性的抗体来进一步确定阻滞条带所结合的蛋 白质。结合定点突变技术，还可以用来研究蛋白结合核酸的关键位点。 许多生物学过程，如染色体的包装、维持及控制，都与蛋白质-DNA 间的 非特异性相互作用有关。在古菌中发现的某些小分子量 DNA 结合蛋白具有与组 蛋白类似的功能，按分子量不同分为 7kDa、8kDa 和 10kDa 三类。本实验中所 用的蛋白质 Sul7d 是来源于嗜酸热硫化叶菌 （Sulfolobus acidocaldarius）中的 7kDa 蛋白，能够和 DNA 非特异性结合。本实验中利用 EMSA 实验验证体外