cdx2启动子双荧光素酶报告基因载体的构建及 - 第三军医大学学报.doc

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2017-08-02 发布于天津
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cdx2启动子双荧光素酶报告基因载体的构建及 - 第三军医大学学报.doc

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转录调控人结肠癌上皮细胞内基因表达的研究钟小莉尚杨杨潘琼李珊珊刘韵叶钧宋丽丽赵晶京彭志红汪荣泉重庆第三军医大学西南医院全军消化病研究所探讨对的转录调控作用方法构建包含个不同长度的近端启动子的荧光素酶报告基因质粒分别命名为将各质粒分别转染到和细胞中检测细胞中的双荧光素酶活性采用染色质共免疫沉淀技术用抗体免疫沉淀与启动子区片段相结合的扩增启动子的特异性序列结果双酶切及测序结果证实重组质粒插入片段序列均正确转录因子数据库预测到近端启动子区含多个结合位点和潜在的等顺式作用元件重组质粒在细胞中的荧光素酶活

Ascl2转录调控人结肠癌上皮细胞内CDX2基因表达的研究钟小莉，尚杨杨，潘琼，李珊珊，刘韵，叶钧，宋丽丽，赵晶京，彭志红，汪荣泉（400038重庆，第三军医大学西南医院全军消化病研究所探讨Ascl2对CDX2的转录调控作用。方法构建包含8个不同长度的CDX2近端启动子的荧光素酶报告基因质粒，分别命名为pGL3-CDX2-C1-8；将各质粒分别转染到shRNA-Ascl2/LS174T和shRNA-Ctr/LS174T细胞中，检测细胞中的双荧光素酶活性。采用染色质共免疫沉淀（ChIP）技术，用Ascl2抗体免疫沉淀与CDX2启动子区DNA片段相结合的Ascl2，PCR扩