蛋白质纯化 - 庄荣辉.pdfVIP

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蛋白质纯化 - 庄荣辉

酵素純化與分析 蛋白質純化 Protein Purification 國立台灣大學微生物與生化所莊榮輝 ■如何開始? 先考慮以下諸點: 5W a. 要純化那一個蛋白質? What ? b. 為何要純化此蛋白質? Why ? c. 由何種材料純化? Where, from ? d. 由那一個生長期? When ? e. 如何純化此蛋白質? How ? ■蛋白質純化過程有三個階段 (1) 粗蛋白(crude protein) ︰ 採樣→均質打破細胞 → 抽出全部蛋白, 多用鹽析沉澱法。 (2) 部分純化(partially purified) ︰ 初步的純化,使用各種管柱層析法。 (3) 均質蛋白質(homogeneous) ︰ 目標蛋白質的進一步精製純化,可用製備式 電泳或HPLC 等。 ■ A 純化階段 B 分析方法 ( 1 ) Material Background knowledge about Material 蛋 C r u d Protein / Activity assay e 白 P r Extraction o (1) 粗蛋白 t e i 質 n ( Electrophoresis 1 Protein % Naive fractionation 純 p SDS u r Ammonium sulfate Gradient PAGE e 化 ) Organic solvent Kinetic study (

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