萌发期大豆总蛋白提取及双向电泳体系的优化.pdf

中国油料作物学报 ２０１５，３７（２）：２２０－２２６ ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＯｉｌＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅｓ ｄｏｉ：１０．７５０５／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７－９０８４．２０１５．０２．０１５ 萌发期大豆总蛋白提取及双向电泳体系的优化 １ １ ２ １ １ １ １ １ １ 王新芳 ，郭　娜 ，郭祥龙 ，牛景萍 ，张海鹏 ，卜远鹏 ，彭　洋 ，邢　邯 ，赵晋铭 （１．南京农业大学／国家大豆改良中心／农业部大豆生物学与遗传育种重点实验室（综合）／ 作物遗传与种质创新国家重点实验室，江苏 南京，２１００９５；２．圣丰种业院士工作站，山东 济宁，２７２０００） 　　摘要：蛋白质样品的制备和双向电泳条件是蛋白组学研究中很关键同时也是很棘手的问题。本文比较了 ＴＣＡ／丙酮法、酚抽提、苯酚／ＳＤＳ法３种不同的蛋白提取方法，并对双向电泳的一些条件进行了优化，建立了适合萌 发期大豆总蛋白的双向电泳体系，即采用 １７ｃｍ、ｐＨ４－７的ＩＰＧ胶条，凝胶浓度为 １２％，蛋白质上样量为０．２ｍｇ。 ＩＥＦ程序为：２５０Ｖ１ｈ，５００Ｖ１ｈ，３０００Ｖ３ｈ，８０００Ｖ１ｈ，１００００Ｖ１ｈ，１００００Ｖ６００００Ｖｈ。本研究为萌发期大豆的蛋白 组学研究提供了实验方法。 关键词：大豆；萌发；蛋白组学；双向电泳 中图分类号：Ｓ５６５．１０３　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００７－９０８４（２０１５）０２－０２２０－０７ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｏｔａｌｐｒｏｔｅｉｎｓｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｔｗｏ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｓｙｓｔｅｍｆｏｒｓｏｙｂｅａｎｓｅｅｄｄｕｒｉｎｇｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ １ １ ２ １ ＷＡＮＧＸｉｎ－ｆａｎｇ，ＧＵＯＮａ，ＧＵＯＸｉａｎｇ－ｌｏｎｇ，ＮＩＵＪｉｎｇ－ｐｉｎｇ， １ １ １ １ １ ＺＨＡＮＧＨａｉ－ｐｅｎｇ，ＢＵＹｕａｎ－ｐｅｎｇ，ＰＥＮＧＹａｎｇ，ＸＩＮＧＨａｎ，ＺＨＡＯＪｉｎ－ｍｉｎｇ （１．ＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＳｏｙｂｅａｎＩｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ／ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＧｅｎｅｔｉｃ ＩｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｏｆＳｏｙｂｅａｎ（Ｇｅｎｅｒａｌ），ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ／ＮａｔｉｏｎａｌＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＣｒｏｐＧｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄＧｅｒｍｐｌａｓｍＥｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ，ＮａｎｊｉｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００９５，Ｃｈｉｎａ； ２．ＳｈｏｆｉｎｅＡｃａｄｅｍｉｃｉａｎＷｏｒｋｓｔａｔｉｏｎ，Ｊｉｎｉｎｇ２７２０００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｓａｍｐｌｅｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｐｌａｙｃｒｕｃｉａｌｒｏｌｅｓｉｎｐｒｏｔｅｏｍｉｃｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ｙｅｔ ｔｈｅｙｃａｎｂｅｐｒｏｂｌｅｍａｔｉｃ．Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ｗｅｃｏｍｐａｒｅｄｔｈｒｅｅｐｒｏｔｅｉｎｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇＴＣＡ／ａｃｔｏｎｅｍｅｔｈ ｏｄ，ｐｈｅｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｐｈｅｎｏｌ／ＳＤＳｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ．Ｗｅａｌｓｏｏｐｔｉｍｉｚｅｄｔｈｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓａｎｄｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｐａｒａｍｅｔｅｒｓｏｆ ｔｗｏ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｆｏｒｔｈｅｓｏｙｂｅａｎｓｅｅｄｄｕｒｉｎｇｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄ