PCR技术的原理与方法题库.pptVIP

* PCR技术的原理与方法 钟召迪 PCR定义 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction)简称ＰＣＲ，是一项在短时间内大量扩增特定的ＤＮＡ片段的分子生物学技术。 是指在DNA 聚合酶的催化下，以母链DNA 为模板，一特定引物为延伸起点，经过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出于母链模板DNA互补的子链DNA的过程。 可用于基因分离克隆，序列分析，基因表达调控，基因多态性研究等。 PCR反应特点 特异性强 灵敏度高 简便、快速 对标本的纯度要求低 PCR技术的基本原理 PCR的反应成分 PCR的反应基本步骤 PCR的反应体系 PCR的反应成分 模板DNA 引物 四种脱氧核糖核苷酸 DNA聚合酶 反应缓冲液，Mg2 PCR的反应基本步骤 PCR的反应基本步骤 变性：高温使双链DNA解离成单链（94 ℃ ，30s） 退火：低温下，引物与DNA模板互补区结合（55 ℃ ， 30s ） 延伸：中温延伸，DNA聚合酶催化以引物为起点的DNA链延伸反应（70~72 ℃ ，30~60s） PCR的反应体系 10×扩增缓冲液 1/10体积 4种dNTP混合物 各200umol/L