细胞器蛋白制备.pptVIP

LOGO LOGO 细胞与细胞器蛋白的制备 细胞与细胞器蛋白质的制备 细胞与细胞器蛋白质的提取 蛋白质纯化 细胞及细胞器蛋白质的提取 意义： 在研究细胞时经常要研究细胞的不同组份，而研究得最多的细胞组份就是细胞核、线粒体和细胞浆。 分离细胞核、线粒体和细胞浆蛋白，不仅可以用于研究蛋白在细胞内的定位，而且很多时候分离出来的蛋白可以用于细胞信号转导通路方面的研究。 细胞及细胞器蛋白质的提取 1.细胞核蛋白质的提取 2.线粒体及细胞浆蛋白质的提取 3.全细胞蛋白质的提取 细胞及细胞器蛋白的提取 1.细胞核蛋白质的提取 （1）取对数生长的HeLa细胞计数，按1.6×106 个细胞接种于100mm培养皿中，培养适当时间； （2）收取细胞与培养液至离心桶中，4℃、3000 rpm/min 离心5分钟，弃上清； （3） 用1 ml 预冷的PBS重悬细胞沉淀，并将其移入预冷的EP管，离心升至12000rpm/min即停止，弃上清； （4）细胞沉淀用homogenization buffer重悬； （5）使用Dounce homogenizer对细胞重悬液进行homogenize，操作次数视细胞株与操作人而定； （6）4℃、1000/min 离心5分钟，弃上清，沉淀即为细胞核； （7）向细胞核沉淀中加入适量裂解液RIPA，充分混匀，冰上