细胞离子成像和检测.pdf

细胞离子成像 细胞离子成像/FRET简介 钙离子是生命活动最重要的离子之一，通过测 荧光共振能量转移(FRET)是指两个荧光发色基 定细胞内游离钙离子浓度，科研工作者可以得知肌 团在足够靠近时，当供体分子吸收一定频率的 肉收缩、神经信号传导、细胞间通讯、激素反应等 光子后被激发到更高的电子能态，在该电子回 生命活动的重要信息。 到基态前，通过偶极子相互作用，实现了能量 + 另外，许多非金属阴离子，如H ，NO等及细胞 向邻近的受体分子转移（即发生能量共振转 膜电位的检测和线粒体膜电位的快速检测对于观察 移）。FRET是一种非辐射能量跃迁，通过分子间 细胞的生物学特性有着重要的价值。 的电偶极相互作用，可以检测分子发生的共价 目前世界上胞内钙离子的主流测量方法分为电 键结合和分子构象改变。因此利用FRET可以进行 测量法和光测量法。其中，光测量法利用能与离子 细胞内离子变化、蛋白磷酸化、细胞信号通路、 特异性结合的荧光探针来测定细胞荧光强度的变化， 蛋白修饰、细胞内分子的相互作用和蛋白相互 若利用标准溶液来制作标准曲线，甚至可以测量出 作用等。 胞内离子 （包括钙离子和其他金属和非金属离子） 的绝对浓度，是目前世界上测量胞内游离钙离子浓 度最为权威的方法之一！ 离子成像方法 非比例成像法 采用Fluor-3 ，Fluo-4等荧光试剂标记细胞内 离子（如钙离子），当离子浓度升高，荧光信 号增强，根据荧光信号的强弱变化确定离子浓 度的改变。实验方法简单，易受漂白等影响。 比例成像法 采用Indor-1或Fura-2等荧光试剂标记细胞内离 子（如钙离子），结合离子的结合态试剂与非结 合态试剂激发/发射光谱不同，当离子浓度改变时， 通过结合态和非结合态试剂获得的荧光图像进行 除法计算，即可获得准确离子浓度。离子浓度测 量准确，且不受光漂白的影响。 FRET法 Cameleon YC3.6是基于绿色荧光结合荧光共振能量 + 转移(FRET)技术的Ca2 指示器。当钙离子与Cameleon蛋 白结合后，Cameleon蛋白空间三维结构发生改变，CFP 和YFP基团紧密相邻，从而发生FRET，并通过CFP和FRET 的比例成像计算，指示出离子的变化。 MetaFluor离子成像/FRET系统—MF-R Molecular Devices的离子成像系统，能够提供整个系统和系统升级服务。系统内包含的高精度和高 速度部件能够为高速度离子成像分析和高精度比例成像，配合最高水平的MetaFluor软件系统，能够用 于： ●神经细胞，心肌细胞，骨骼肌细胞，胰岛细胞等 2+ 2+ 2+ + - + ●各种离子（Ca 、Mg 、Zn 、K 、Cl 、Na 、pH）的荧光比值测量以及单波长荧光测量。 ●快速的FRET测量。 光源系统 高精度高稳定性的光源系统，能够确保稳定可 靠的离子浓度测量，同时提供超长寿命，无需频繁 更换灯泡。 波长切换 长寿命光源系统 高速的切换装置，能够快速切换激发光波长， 方便快速的进行比例和非比例成像分析。 成像检测器 MF-R比例成像系统可根据使用要求配置多种检 测器，包括CCD，sCMOS和EMCCD，提供高分辨率、 高速度、高灵敏度的实验结果。 多种类型的CCD 能够整合多种外围设备 MF-R比例成像系统能够整合多种外周设备，包 括与膜片钳联用，整合自动灌流设备等。并能通过 自动控制外围设备实现实验无人值守自动化。 实时获得细胞离子绝对浓度 系统能够无限制圈选感兴趣区域（ROI）与