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第 13 章 高效液相色谱法 教学时数：6 学时 教学要求： 1. 熟悉 HPLC 的基本原理。 2. 了解高效液相色谱法的优点及使用范围； 3. 理解常用检测器的原理、优缺点及适用范围； 4. 理解各种分离方式（液固色谱；液液色谱；键合相色谱；离子交换色谱；离子对色谱； 排阻色谱）的原理、适用的分析对象及选择原则。 教学重点与难点： 1. 高效液相色谱法。高效液相色谱法的特点。高效液相色谱与气相色谱的异同点。 2. 高效液相色谱仪的组成及工作原理。 3. 高效液相色谱的固定相及流动相。 4. 高效液相色谱的分离方式（液固色谱；液液色谱；键合相色谱；离子交换色谱；排阻 色谱）。 5. 色谱分离方式的选择。 13－1 概述 高效液相色谱法是以气相色谱为基础，在经典液相色谱实验和技术基础上建立的一 种液相色谱方法。 经典 LC 与 HPLC 比较 经典LC HPLC 经典LC HPLC 柱之内径 1~5cm ~0.4cm 柱之内径 1~5cm ~0.4cm 长度 50~ 100cm 15~50cm 长度 50~ 100cm 15~50cm 填充材料粒度 150µm~200µm 4µm~ 10µm 填充材料粒度 150µm~200µm 4µm~ 10µm 使用压力 1~ 10atm 50~200atm 使用压力 1~ 10atm 50~200atm 分离时间 0.5h~天 ~ 10min 分离时间 0.5h~天 ~ 10min HPLC 特点：高压、高速、高效、高灵敏度、样品回收方便 与气相色谱法比较，HPLC 的优点： 1. 分析对象广 气相色谱只限于分析气体和沸点较低的化合物；HPLC 不受样品 挥发性和热稳定性的限制，适用于高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质。原 则上讲，几乎可以分析除永久气体外所有的有机和无机化合物。 2. 流动相对分离起作用 气相色谱的流动相仅起运载作用，对组分不产生相互作 用力；HPLC 的流动相对组分产生相互作用力，相当于增加了一个控制和改进分 离条件的参数。 3. 经常在室温条件下操作 气相色谱法一般在较高温度下进行 一. 液相色谱分离原理及分类 液相色谱分离原理：液相色谱的分离系统也由两相— 固定相和流动相组成。被分离 混合物由流动相液体推动进入色谱柱中。根据各组分在固定相及流动相中吸附能力、分 配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异进行分离。 色谱分离的实质是样品分子与溶剂（流动相）及固定相分子间的作用力，作用力的 大小，决定色谱过程的分离行为。 根据分离机理可分为：液－固吸附色谱法、液－液分配色谱法、离子色谱法和凝胶 色谱法。 13－2 高效液相色谱仪 高效液相色谱仪一般都具备贮液器、高压泵、梯度洗提装置（用双泵）、进样器、 色谱柱、检测器、恒温器、记录仪等主要部件。