谷胱甘肽-s-转移酶（gst）融合蛋白纯化试剂盒产品说明书（中文版 .pdfVIP

谷胱甘肽-S-转移酶（GST ）融合蛋白纯化试剂盒产品说明书（中文版） 主要用途 谷胱甘肽-S-转移酶（GST ）融合蛋白纯化试剂是一种旨在通过谷胱甘肽亲和树脂的高度选择性 结合，进一步竞争性温和洗脱，获得非变性的重组谷胱甘肽-S-转移酶标记蛋白的权威而经典的技术方法。 该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种融合或标记在谷胱甘肽-S-转移酶上目标 蛋白以及谷胱甘肽过氧化物酶和乙二醛酶Ｉ的分离纯化等。产品即到即用，性能稳定，操作便捷，纯化谷 胱甘肽-S-转移酶结合能力强（2－4毫克/次），回收纯度和效率可达95％。 技术背景 研究编码蛋白首先通过重组 DNA 技术在细菌中表达，其中谷胱甘肽-S-转移酶（GST ）融合蛋白系统有效 地帮助目的基因获得高表达的目标蛋白。目的基因被引入到细菌中高度表达的谷胱甘肽-S-转移酶基因，利 用该基因的表达系统，避免了翻译过程中影响表达的各种因素，从而得到满意的表达产物。除了谷胱甘肽 -S-转移酶 （GST ）融合蛋白系统，还有 His 标记、β－半乳糖苷酶融合蛋白、trpE 融合蛋白、硫氢还原 （Trx ） 融合蛋白系统等。 产品内容 平衡液（Reagent A ） 毫升 亲和液（Reagent B ） 毫升 洗脱液（Reagent C ） 毫升 产品说明书 1 份 保存方式 保存 亲和液 （Reagent B ）和 洗脱液 （Reagent C ）在－20℃冰箱里，其余的保存在 ℃ 冰箱里；有效保证 6 月 用户自备 细菌可溶性总蛋白样品：用于纯化的待测样品 1.5毫升离心管：用于反应操作的容器 15毫升锥形离心管：用于胶体溶液配制的容器 平式摇荡仪：用于混匀反应物 台式离心机：用于沉淀反应物 实验步骤 亲和液（Reagent B） 洗脱液（Reagent C） 实验开始前，将 和 从 ℃冰箱里取出，在冰槽 里融化。然后进行下列操作。 1 1． 从 ℃冰箱里取出用户自备的通过细菌扩增分离的细菌可溶性总蛋白样品（清澈上清） 2． 置于室温下 分钟，直至融化（使蛋白重新折叠） 3． 移出 毫克（ 毫升内）样品到 毫升锥形离心管 4． 加入 毫升 平衡液（Reagent A），用手混匀 5． 加入 毫升 亲和液（Reagent B），用手混匀 6． 平放在平式摇荡仪上，在 ℃温度下孵育 分钟，速度为 RPM 7． 放进 ℃台式离心机离心 分钟，速度为 g 8． 小心抽去上清液 9． 加入 毫升 ，用手混匀 平衡液（Reagent A） 10．全部转移到 毫升离心管 11．再加入 毫升平衡液（Reagent A）到 毫升锥形离心管，清洗管壁 12．移出合并到 毫升离心管 13．放进 ℃微型台式离心机离心 分钟，速度为 g 14．小心抽去上清液 15．加入 毫升平衡液（Reagent A），用手混匀 16．放进 ℃微型台式离心机离心 分钟，速度为 g 17．小心抽去上清液 18．加入 微升洗脱液（Reagent C），用手混匀 19．平放在平式摇荡仪上，在 ℃温度下孵育 分钟，速度为50RPM 20．放进 ℃微型台式离心机离心 分钟，速度为 g 21．小心移取上清液到预冷的新的 毫升离心管，置于冰槽里 22．重复实验步骤 至 二次 23．保存纯化的蛋白在 ℃冰箱里 24．或移取 至 微升进行 SDS电泳鉴定以及BRADFORD 蛋白定量（ 至 微克/微升） 注意事项 1． 本产品为5次操作 2． 操作时，须戴手套 3． 整个操作在4℃温度下进行 4． 用户扩增的细