不可忽视的细课—血液基因组提取.ppt

不可忽视的细节  —血液基因组提取 浓度：100－300ng/ul 纯度：任何杂质都可能导致DNA在储存过程中的降解，因此要确保纯化得到的核酸的纯度。 温度：纯化得到基因组DNA之后需将DNA溶液分装保存到-20℃，反复冻溶会导致DNA的降解。 溶解DNA Buffer：纯化得到的基因组DNA最好溶解在TB Buffer (TIANGEN) 或者Tris缓冲液里，因为大片段的基因组DNA在酸性水溶液中不稳定，易水解。 纯度（ OD260-320 /OD280-320 ） 紫外分光光度计进行测量（选择正确的稀释倍数，确保OD260 值在0.1~1.0之间，通常离心柱法稀释4－5倍；溶液裂解法稀释20－30倍）OD260-320 /OD280-320 1.7 说明有蛋白的污染OD260-320 /OD280-320＝1.7～1.9 说明纯度很好OD260-320 /OD280-320 1.9 说明有部分降解或有RNA污染 得率 紫外分光光度计进行测量Yield＝ OD260×50ng/ul×稀释倍数 电泳检测要控制上样量。上样量过大会导致泳道过亮、拖尾等现象，影响正确判断。 如果加样孔里有亮带，说明有蛋白污染。 若上样量合适，泳道有弥散、拖尾现象，说明书基因组DNA有降解。 TIA