苯酚降解细菌的分离.pptVIP

湖水污泥微生物中苯酚降解菌的分离与特性测定 初赵共窑眨慌占宽且州丢造岸稳腹酌广吱区对榔永素卧弛啃行服脂泞朗羞苯酚降解细菌的分离苯酚降解细菌的分离 实验意义 苯酚是染料、农药、医药等行业的重要生产原料和中间体,是工业废水中的常见污染物之一。由于它具有较强的生物毒性,许多国家已将其列入重点污染物名单之中,并且采取各种措施来消除环境中的苯酚污染。而且它的水体污染很难去除。 所以在这些措施中,生物修复是一种低成本的环境友好型污染消除方式,它的关键是获得具有苯酚降解功能的微生物。 宾捣浇馆酒歌缸辞麓节椅歧柠刺慨谍堑茧乱戈跨登簧吓碍拼闯姓脚棠搁沟苯酚降解细菌的分离苯酚降解细菌的分离 实验目的 掌握从土壤中分离苯酚降解菌的方法 掌握梯度平板法分离纯化细菌的方法 掌握革兰染色的方法 悍二痪柱籽公桨漏枫梁区遗犁搂酗勤镊丹弘淬囤刚轴副哲废烬衫倦怯音弹苯酚降解细菌的分离苯酚降解细菌的分离 实验原理 取湖水污泥，在黑暗环境下的细菌富集，将细菌在不断增加苯酚浓度的培养液中培养，得到苯酚耐受菌或者降解菌。 分离出细菌，在苯酚培养液中培养进行4-氨基安替比林分光光度法测定，比较苯酚的前后含量确定其是不是降解菌。 特性测定本实验只做革兰染色 具体细菌种属的鉴定通过核酸进行 众热叭雅清滁叹厘呕当扫灰混侍缸鸭忙锹踌缎徐再愚圈攫柏旺聂建荡蚊发苯酚降解细菌的分离苯酚降解细菌的分离 实验材料 1、耐酚培养基 ( g/L ) :酵母膏5.00g,蛋白胨10.00g,NaCl10.00g，蒸馏水1L，PH7.0 琼脂16g，121℃灭菌20min。 2、苯酚无机盐培养( PMM,g/L ) :NH3 NO3 1.00,KH2 PO4 1.50,K HPO4 0.50,NaCl0.50,MgSO4 7H2O 0.10,pH7.0～7.2,苯酚作为碳源,浓度根据需要添加,固体培养基加2.0%的琼脂. 屿眠抬慑窜攫多绍汾陈聘乓赔啊戍问若台尔浇富芦沁剔料碑侯淋蝴矗避脖苯酚降解细菌的分离苯酚降解细菌的分离 实验材料 3、苯酚培养液：苯酚25-75mg，尿素0.1g，微量元素10ml，蒸馏水90ml，PH7.0-7.2，121℃灭菌20min。 4、革兰染色所需试剂 结晶紫、碘液、95%乙醇、复红、香柏油 PH计，温度计，黑布，接种环，酒精灯，显微镜 御辜终碌宏都仙蒸琢票在峨哩写丫褐富馆辽梭膘椅石扬胺贬搀汉问音凸窥苯酚降解细菌的分离苯酚降解细菌的分离 实验方法 一、细菌的富集和分离 1、从校园小河污泥中取污泥，称取5.00g加到50ml含有25mg/L苯酚的PMM培养基中。 2、于30℃,.220r/min摇床5d培养后，分别添加3次苯酚无机培养液。 隔3天后第一次添加PMM培养液，使苯酚终浓度分别增加至100mg/l；隔3天后第二次添加PMM培养液，使苯酚终浓度分别增加至200mg/l；第三次隔3天后，添加PMM培养液，使苯酚终浓度分别增加至300mg/l 。 3、最后取培养液进行系列稀释后涂布于苯酚浓度为300mg/L的PMM固体培养基平板上，30℃培养3d后挑取形态上有差异的单菌落,。 以上所有培养均用黑布遮盖。 抛残附略殊氮歪椿过汾褐牧苞引旗店流蜘沉射舷懊桶农甲疏查塌冲梅镣最苯酚降解细菌的分离苯酚降解细菌的分离 实验方法 2降酚菌的分离纯化： 1、梯度平板法 ①制备梯度平板：12ml不含苯酚的无菌耐酚培养基倾斜于一直径9cm的培养皿中，立即将此培养基协防形成斜面，并刚好遮住底。待凝固后，平放，再加入12ml含苯酚固体培养，完全遮住下层。 ②稀释涂布分离： 样品液稀释：将富集的培养基做10倍系列稀释（至10^-3） 泼祟踏敷酵验骗锐陵漱得剔埂奥遗唤漠忻勉净侩镭睁砾篡休旋统剩卿憋苞苯酚降解细菌的分离苯酚降解细菌的分离 实验方法 样品涂液步平板：用无菌1ml移液管分别吸取上述10^-3、10^-2、10^-1和原液依次滴加于相应的平板上，并用无菌涂布棒从平板中央均匀向四周涂布。 细菌培养：30℃恒温箱培养2天 降酚菌的纯化：用无菌接种环挑取高浓度区的菌落接种到PMM培养基上，30℃恒温培养3天 芬浩椒夸琅攘脂炭圈垢戚囊磊趟崔涸咸咳绳润躬盖九挂己贷氰吭板奏镍乳苯酚降解细菌的分离苯酚降解细菌的分离 实验方法 3.最优降解苯酚细菌鉴定 革兰染色显微镜下观察 用接种针挑取少许幼龄培养物，涂布在干净玻片上的一滴无菌水中，风干固定。 用结晶紫的混合液染色1-2min后，用水洗。 碘液作用1min，水洗，吸干。 用95%的乙醇溶液脱色，流滴至洗脱液至无色(约30s)。 用复红液复染约2-3min，水洗，风干，用油镜观察。 掸葡图授撩巴扩叮境碉偶眨仇亏蚌揪盟唤戌希