酯酶和氧化酶.pptVIP

酯酶;一、基本概念 1. 定义： 　酯酶(Esterase), 催化作用于酯类物质的酯健,使之水解的酶的总称,包括磷酸酶, 羧酸酯水解酶, 硫酸酯水解酶等。 羧酸酯水解酶(Carboxylic ester hydrolase)，是所有能催化羧酸酯水解的酶的总称（或称酯酶），其作用是水解脂肪族酯和芳香族酯，催化的反应式：;2. 酯和酯键 酯由来自羧酸的酰基和来自醇的烃氧基组成，是羧酸与醇反应失水而生成，即羧基上羟基和醇羟基上的氢共同脱水。通式R-CO-OR`，结构上可看作羧酸中的羟基被烃氧基（-OR`）取代的产物，亦可看作醇中羟基的氢原子被酰基（R-CO-）取代的产物。;酰基（R-CO-）是含氧酸分子（RCOOH）中去掉酸性OH后（即能离解出H+的OH基）余下的基团。包括丙酰基(丙酸）、苯甲酰基（苯甲酸）、草酰基（草酸）、苯磺酰基（苯磺酸）、亚硝酰基（亚硝酸）、亚硫酰基（亚硫酸）、磷酰基（磷酸）。;董痛列澎昔阮人痛雪可仗铣旋考韩毙舔洁纹煤吾紧刹董控躲嗡毋疽克捶呸酯酶和氧化酶酯酶和氧化酶; 3. 酯酶与水解反应 　 羧酸酯酶水解羧酸酯为醇和羧酸 　芳香酯酶水解乙酸苯酯为酚和乙酸 　脂肪酶水解甘油三酯为甘油二酯和脂肪酸 　乙酰酯酶水解乙酰酯为醇和乙酸 　乙酰胆碱酯酶水解乙酰胆碱为胆碱和乙酸 　胆碱酯酶水解酯酰胆碱为胆碱和羧酸;　 根据酶对底物、pH、激活剂、抑制剂的反应特点，可将酯酶分为20余种，在生物化学上统称为酯酶，只有一部分可用组化的方法证明。通常根据对底物是否具有特异性，可分为特异性与非特异性酯酶两种。分解短链（C2～C4）低级脂肪酸酯多为非特异性酯酶，如芳香基酯酶、羧酸酯酶和乙酰酯酶。特异性酯酶据其底物特异性可分为，分解长链(C8以上）高级脂肪酸酯的酶称酯酶(Lipase)，分解乙酰胆碱的乙酰胆碱酯酶，分解酯酰胆碱的胆碱酯酶。;（一）非特异性酯酶(non-specific esterase)： 无底物特异性。根据E600, DFP, PCMB对它们的抑制作用不同，分为3类. 1. 芳香\基酯酶(Aromesterase)，即A-酯酶，亦称有机磷酸抵抗性酯酶I。 （１）底物： 　　　?－萘酚乙酯 萘酚ＡＳ乙酸酯类 吲哚酚乙酸酯类;（２）完全抑制 ①10mmol/L 磷酸二乙基对硝基苯酯(E 600) ②1mmol/L CuSO4 ③1mmol/L Pb(NO3)2 ④10mmol/L AgNO3 ⑤100 ?mol/L 对氯高汞苯甲酸(PCMB) （３）激活 １mmol/L　半胱氨酸(Cysteine);２、脂肪族酯酶（aliesterase),即B-酯酶，亦称有机磷酸敏感性酯酶 （１）底物 ?－萘酚乙酯； 萘酚ＡＳ乙酸酯类； 吲哚酚乙酸 酯类。 （２）完全抑制 10?mol/L　磷酸二乙基对硝基苯酯(E-600) 100?mol/L　毒扁豆碱(Eserine) 10mmol/L AgNO3;３.乙酰酯酶(acetylesterase)：即C-酯酶， 又称有机磷酸抵抗性酯酶Ⅱ （１）底物 吲哚酚乙酸酯类 萘酚AS乙酸酯类 （２）完全抑制 10mmol/L ?-苯丙酸 10mmol/L AgNO3 1mmol/L CuSO4 （３） 激活 100?mol/L 对氯高汞苯甲酸(PCMB) 100?mol/L 苯氯化汞;非特异性酯酶;（二）特异性酯酶(Specific esterase) 根据底物的特异性分为三种: １、脂酶(Lipase) 底物：高级脂肪酸 抑制剂：毒扁豆碱(eserine) 激活剂：2.5%牛磺胆酸钠 ２、胆碱酯酶(cholinesterase) 特异性底物：丁酰硫代胆碱 抑制剂：四异丙基氨基焦酰胺(ISO-OMPA) 3、乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase) 　 底物：乙酰－?－甲基硫代胆碱 　　　　 乙酰硫代胆碱 　　　　 ３－乙酰基－５－吲哚重氮盐 　 抑制剂：四异丙基氨基焦酰胺(ISO-OMPA);酯酶的鉴别 １、根据底物特异性 　　选择特异底物配制孵育液 ２、选择一定浓度的抑制剂或激活剂 　　通常使用抑制剂的方法是向底物液中加抑制剂或将切片在抑制液中浸渍。 　　;（一）显示法 A.偶氮色素法 １、反应原理 　　在酶作用下，从底物游离出来的?-萘酚AS与重氮盐偶联形成偶氮色素，同时沉着于酶的存在部位，通过偶氮色素显色，间接证明酶的存在部位。 　　?-萘酚系统可用重氮盐坚牢蓝Ｂ，坚牢蓝RR，坚牢红RC盐。 　　萘酚AS系统用柘榴石（黄色）、GB盐、坚牢红RC、坚牢红紫LC盐。;防俞饥矽硫添耗聂取磨滞脸制扛仕四遍籽复乞颈婴瓜科坤茁刹虽逾亡妊湖酯酶和