北京大学医学部攻读硕-博士学位研究生课题研究计划书.doc.docVIP

北京大学医学部 攻读 博 硕 士学位研究生课题研究计划书 研 究 生 李玉霞 学 号 1411210743 年 级 2014级 院 （部） 北京大学/香港科技大学医学中心 业 医学生物化学与分子生物学 导 师 方征宇 课题研究开始日期: 2015年 03 月 09 日 北京大学研究生院医学部分院培养办公室制表 说 明 本计划书由研究生本人在本学科内作过开题报告后填写，一式三份；经院(部)主管部门批准后一份留教研室，一份留院（部）主管部门，一份送研究生院医学部分院培养办公室备案。 计划批准后不得随意更改。如有特殊情况确需变更者，需填写变更报告，逐级审批。 研究课题名称 黑色素瘤顺铂获得性耐药相关microRNA筛选及其功能的研究 研究课题的目的、理论与实际意义、国内外研究情况简介 课题的目的：microRNA的高通量筛选比较，找到耐药相关的microRNA，作为潜在的治疗靶点。 2、分析耐药相关microRNA通过调控哪些基因的表达来影响黑色素瘤细胞的耐药性，阐明其分子机制。 理论与实际意义：3-5%。其中白色人种发病率明显高于其他人种, ,我国和日本等亚洲国家的黑色素瘤发病率与欧美国家相比相对较低,但近年来其发病率呈迅猛上升趋势。恶性黑色素瘤治疗方法主要有手术治疗、放射治疗、化学药物治疗及生物免疫治疗等。化疗在恶性黑色素瘤治疗中仍占有重要地位。目前化疗药物主要有顺铂、长春新碱和组蛋白去乙酰化酶抑制剂等。顺铂是现在临床上多种化疗方案中的主要药物之一,通过与癌细胞的脱氧核糖核酸发生交叉联结,诱导肿瘤细胞的凋亡而起抗癌作用,属细胞增殖周期非特异性药物，但是多种恶性黑色素瘤常会对顺铂产生天然或获得性耐药,因而提高顺铂的抗肿瘤作用,解决顺铂耐药在恶性黑色素瘤的化疗中有着重要的实际意义。 顺铂耐药机制,主要包括细胞内药物积累的减少，DNA损伤修复作用增强,凋亡通路的变化以及一些microRNA的异常表达。由于microRNA的表达易于调控，如果能找到黑色素瘤中与耐药相关的microRNA，可建立以此为靶点的干预手段。 国内外研究情况简介：microRNA的变化会影响肿瘤对顺铂的敏感性，而目前关于microRNA在黑色素瘤顺铂获得性耐药机制中的作用研究较少。 主要研究内容 研究内容1顺铂耐药株M7、M21 、SK-MEL-103、M29 、A375、M8 、SK-MEL-19对细胞中A375、M8、SK-MEL-19A375、M8microRNA的表达谱芯片。 研究内容2：黑色素瘤耐药株原始株microRNA芯片分析及验证microRNA表达谱顺铂耐药株中的microRNA荧光定量PCR进行验证确定要研究的microRNA。 耐药相关基因预测microRNA文献汇总顺铂耐药基因顺铂与原始株中荧光PCR验证，microRNA。 研究内容4：microRNA对黑色素瘤顺铂耐药 根据microRNA靶基因预测数据库找到靶基因研究microRNA对顺铂黑色素瘤耐药的影响及其分子机制。 构建黑色素瘤顺铂耐药株 MTS法检测药物敏性耐药的耐药 黑色素瘤顺铂耐药株与原始株microRNA芯片分析及验证 Real-time PCR验证microRNA芯片结果 顺铂耐药相关基因反向筛选预测microRNA Real-time PCR验证顺铂耐药相关基因，microRNA靶基因预测数据分析结果 microRNA对黑色素瘤顺铂耐药的影响及其分子机制 Dual-Luciferase Reporter验证microRNA与靶基因的关系，构建靶基相关稳转株，Western Blotting相关蛋白的变化。 2015年3月-2015年8月进度：顺铂构建-2015年12月进度：microRNA芯片及验证耐药相关基因的筛选 2016-2016年10月安排：microRNA对黑色素瘤顺铂耐药的分子机制的 预期结果 通过microRNA芯片找到与黑色素顺铂耐药相关的microRNA microRNA靶基因预测找到microRNA的靶基因 microRNA的靶基因通过调节细胞的相关蛋白顺铂耐药有作用，通过或者表达该基可以黑色素瘤顺铂获得性耐。 周游博士后细胞培养技术员黎满慧、试剂采购技术员董小林 Bio-Rad PCR仪、Bio-Rad Rael-time PCR仪、Bio-Rad 酶标仪、Bio-Rad 电泳仪、 Eppendorf Stuart涡旋振